培養(yǎng)液的滲透壓是一個非常重要的因素,細胞通常可耐受260mOsm/kg～320mOsm/kg。標準培養(yǎng)液的滲透壓在此范圍內(nèi)波動。特別注意：向培養(yǎng)液中加入其它物質(zhì)有可能會明顯改變培養(yǎng)液的滲透壓，特別是溶于強酸或強堿中的物質(zhì)。向培養(yǎng)液中添加HEPES時需按以下方法調(diào)節(jié)鈉離子濃度。緩沖系統(tǒng)大多數(shù)細胞所需pH在-。但是，細胞培養(yǎng)適pH值隨培養(yǎng)的細胞種類不同而不同。成纖維細胞喜歡較高pH(-),而傳代轉(zhuǎn)化細胞系則需要偏酸pH(-)。由于多數(shù)培養(yǎng)液靠碳酸氫鈉（NaHCO3）與CO2體系進行緩沖，因此，氣相中的CO2濃度應與培養(yǎng)液中碳酸氫鈉濃度相平衡。如果氣相或培養(yǎng)箱空氣中CO2濃度設定在5％，培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為；如果CO2濃度維持在10％，培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為。細胞培養(yǎng)瓶蓋不應擰得太緊，以保證氣體交換。HEPES是一種非離子緩沖液，在pH-范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力，但是非常昂貴，在高濃度時對一些細胞可能有毒。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉（）共用，以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。在這種培養(yǎng)條件下，細胞培養(yǎng)瓶的蓋子應擰緊，以防止培養(yǎng)液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。大多數(shù)培養(yǎng)液中含有酚紅作為pH指示劑，酸性培養(yǎng)液呈橙黃色，堿性培養(yǎng)液呈深紅色。TNM-FH昆蟲培養(yǎng)基不含蛋白質(zhì)、脂類或任何生長因子，故此產(chǎn)品需搭配血清或無血清添加物使用。江蘇iclean細胞培養(yǎng)基供應商家

    無血清培養(yǎng)基中通常需要添加一些額外的組分，才能幫助細胞貼壁生長，包括以下幾大類物質(zhì)：1）促貼壁物質(zhì)：一般為細胞外基質(zhì)，如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細胞功能的分化因子，對許多細胞的繁殖和分化，起著重要作用。纖連蛋白主要促進來自中胚層細胞的貼壁與分化，這些細胞包括成纖維細胞、肉瘤細胞、粒細胞、腎上皮細胞、腎上腺皮質(zhì)細胞、CHO細胞、成肌細胞等。2）促生長因子：針對不同細胞添加不同的生長因子。也是刺激細胞生長、維持細胞功能的重要物質(zhì)，有些是許多細胞必不可少的，如胰島素。3）酶抑制劑：培養(yǎng)貼壁生長的細胞，需要用胰酶消化傳代，在無血清培養(yǎng)基中需含酶抑制劑，以終止酶的消化作用，達到保護細胞的目的。常用的是大豆胰酶抑制劑。4）結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)運蛋白：常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加量比較大，可增加培養(yǎng)基的粘度，保護細胞免受機械損傷。許多旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基都含有牛血清白蛋白。5）微量元素：硒是常見的。廣東醫(yī)療細胞培養(yǎng)基廠家直銷M199有兩種平衡鹽成分，Earle’s鹽成分常用于CO2環(huán)境，Hank’s鹽成分用于非CO2的環(huán)境。

    MEMα是一種改良的MEM培養(yǎng)基，與MEM培養(yǎng)基相比MEMα培養(yǎng)基營養(yǎng)更為豐富，在MEM的基礎上又添加了NEAA、**酸鈉、硫酸鋅、VB12、生物素、抗壞血酸等成分，廣泛應用于各種哺乳動物懸浮和貼壁細胞的培養(yǎng)。不含核苷和脫氧核苷的MEMα培養(yǎng)基常常用作DG44和其他DHFR-缺陷型細胞的篩選培養(yǎng)基。L-丙氨酰-L-谷氨酰胺（Alanyl-glutamine，Ala-Glu），又名丙氨酰谷氨酰胺、丙谷二肽，是一種高級細胞培養(yǎng)添加劑，可直接替代細胞培養(yǎng)基中的L-谷氨酰胺。L-谷氨酰胺（Glutamine）是細胞培養(yǎng)中所必需的一種營養(yǎng)素，但其在溶液中不穩(wěn)定，會自發(fā)降解生成氨和焦谷氨酸，其中氨對細胞有害；而L-丙氨酰-L-谷氨酰胺在水溶液中十分的穩(wěn)定，不會自發(fā)的降解。細胞利用其機制是：在細胞培養(yǎng)時，細胞會逐漸向培養(yǎng)液中釋放一種肽酶，將L-丙氨酰-L-谷氨酰水解成L-丙氨酸和L-谷氨酰胺，而后細胞會將這兩種水解產(chǎn)物吸收利用。細胞利用L-丙氨酰-L-谷氨酰的過程與流加培養(yǎng)策略相似，連續(xù)的將低濃度水平的L-谷氨酰胺加入到培養(yǎng)液中，從而提高了L-谷氨酰胺的利用率，且不會生成多余的氨，更利于細胞的生長。L-丙氨酰-L-谷氨酰可以代替等摩爾的L-谷氨酰胺，適用于所有的細胞，幾乎無需適應。

    細胞培養(yǎng)基的種類按照細胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史，細胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細胞培養(yǎng)基、合成細胞培養(yǎng)基、無血清細胞培養(yǎng)基、限定化學成分細胞培養(yǎng)基等幾大種類。（balancedsaltsolution，BSS）BSS主要是由無機鹽、葡萄糖組成，它的作用是維持細胞滲透壓平衡，保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。其主要用于細胞的漂洗、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下（表1-1）。D-Hank's與Hank's的一個主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+，因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因為Ca2+、Mg2+是細胞膜的重要組成成份，參與細胞粘附等功能，使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細胞結(jié)團。此外，Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎溶液，前者緩沖能力較弱，適合于密閉培養(yǎng)；后者緩沖能力較強，適合于5%CO2的培養(yǎng)條件。表1-1幾種常用的BSS配方。即開即用液體配方，DMEM/F12節(jié)省配制時間，提升實驗效率。

    1.細胞培養(yǎng)基的種類按照細胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史，細胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細胞培養(yǎng)基、合成細胞培養(yǎng)基、無血清細胞培養(yǎng)基、限定化學成分細胞培養(yǎng)基等幾大種類。（balancedsaltsolution，BSS）BSS主要是由無機鹽、葡萄糖組成，它的作用是維持細胞滲透壓平衡，保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。其主要用于細胞的漂洗、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下（表1-1）。D-Hank's與Hank's的一個主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+，因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因為Ca2+、Mg2+是細胞膜的重要組成成份，參與細胞粘附等功能，使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細胞結(jié)團。此外，Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎溶液，前者緩沖能力較弱，適合于密閉培養(yǎng)；后者緩沖能力較強，適合于5%CO2的培養(yǎng)條件。天然培養(yǎng)基指來自動物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基，如血漿、血清、雞胚浸出液等。其優(yōu)點是營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果良好，但缺點是成分復雜，來源受限且制作過程復雜、批間差異大。目前使用的天然培養(yǎng)基是血清，另外各種組織提取液、促進細胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細胞也是必不可少。水解乳蛋白是乳白蛋白經(jīng)蛋白酶和肽酶水解的產(chǎn)物。DMEM/F12培養(yǎng)基是在DMEM培養(yǎng)基的基礎上，添加F12培養(yǎng)基中更為豐富的營養(yǎng)成分。江蘇iclean細胞培養(yǎng)基供應商家

Fischer’s培養(yǎng)基不含蛋白質(zhì)、脂類或任何生長因子，故此產(chǎn)品需搭配血清或無血清添加物使用。江蘇iclean細胞培養(yǎng)基供應商家

    Leibovitz’sL-15培養(yǎng)基的緩沖系統(tǒng)由磷酸鹽和游離堿基氨基酸組成，代替了傳統(tǒng)的碳酸氫鈉緩沖系統(tǒng)，同時，用半乳糖和**酸鈉代替葡萄糖可以防止酸性代謝副產(chǎn)物的形成，有助于維持培養(yǎng)液PH的穩(wěn)定，適合用于非CO2平衡環(huán)境的細胞培養(yǎng)。Leibovitz’sL-15培養(yǎng)基適用于猴腎細胞和HEP-2的培養(yǎng)、原代（如胚胎和成人組織）細胞分離、多種病毒的培養(yǎng)以及神經(jīng)元的培養(yǎng)等。NEAA（非必須氨基酸），是在MEM培養(yǎng)基的基礎上添加L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-天（門）冬酰胺、L-天（門）冬氨酸、L-脯氨酸、L-絲氨酸和甘氨酸7種NEAA，能降低細胞培養(yǎng)時細胞自身生產(chǎn)非必須氨基酸的副作用，有效促進細胞增殖代謝。酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑，用以持續(xù)監(jiān)測培養(yǎng)液的酸堿度，在低PH值時酚紅使培養(yǎng)液呈黃色，而較高的PH值時使培養(yǎng)液呈紫色，PH值～，適合細胞培養(yǎng)。但酚紅也有一些缺點，研究表明酚紅可以模擬固醇類（特別是雌）的作用，因此在用到雌敏感的細胞時（如乳腺組織），較好使用不含酚紅的培養(yǎng)基。酚紅會干擾流式細胞分析時候的檢測。此外，一些無血清培養(yǎng)基的配方中若存在酚紅會干擾鈉-鉀平衡。 江蘇iclean細胞培養(yǎng)基供應商家

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