外泌體（exosome），特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。其主要來源于細胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中?，F(xiàn)已證實可以分泌外泌體的細胞有：肥大細胞、淋巴細胞、樹突狀細胞、瘤細胞、間充質(zhì)干細胞等。外泌體在免疫中抗原呈遞、瘤的生長與遷移、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用。同時，不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標志物。細胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA和脂質(zhì)運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介，根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類，包括外泌體、微泡和凋亡小體。外泌體的提取方法：多聚物沉淀法。昆明外泌體提取試劑哪家便宜

腦組織分離方法簡述：將腦組織剪成薄片，放入離心管中加上消化液進行消化，經(jīng)水浴、反復(fù)輕輕上下顛倒，再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中，混勻，置于冰上。再進行一系列的差速超速離心過程，包括除雜、濾膜過濾、超離等。較后用PBS重懸外泌體，用重懸后的外泌體進行下面的透射電鏡（TEM）、納米粒徑追蹤分子（NTA）和markerWB鑒定。外泌體（Exosomes）是細胞分泌到胞外的一種囊泡（ExtracellularVesicles，EVs），其大小為30-150nm，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài)，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等），參與細胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，包括血液、唾液、尿液、、乳汁等，同時也存在于組織樣本中，如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。廈門正規(guī)外泌體提取試劑服務(wù)電話外泌體提?。夯诰酆衔锏某恋砑夹g(shù)通常包括將樣本與含聚合物的沉淀溶液混合。

有研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC患者肺組織外泌體表面EGFR免疫染色呈陽性的占80%，而慢性肺炎組織的外泌體EGFR呈陽性的只占2%，因而認為外泌體的EGFR蛋白可以用作NSCLC與慢性肺炎鑒別診斷的生物標志物。Park等通過Sys-BodyFlu-id數(shù)據(jù)庫分析發(fā)現(xiàn)153種特異性胸腔積液外泌體蛋白質(zhì)，進一步的Westernblotting分析顯示多種特異性胸腔積液外泌體蛋白參與EGFR信號傳導(dǎo)途徑以促進一些病癥的發(fā)生的發(fā)展，因此外泌體蛋白可能作為肺病診斷篩查的生物學(xué)標記物。外泌體相關(guān)蛋白質(zhì)與肺病的診斷：近年來眾多文獻報道，肺病細胞分泌的外泌體中富含多種蛋白質(zhì)并促進肺病的發(fā)生的發(fā)展，是早期診斷肺病的有效途徑。

外泌體研究的主要應(yīng)用：外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型，其可參與到機體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、一些病癥侵襲等方方面面。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細胞與基底細胞的遺傳信息的交換，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成，促進了一些病癥的生長與侵襲。一些病癥。一些病癥轉(zhuǎn)移。來自白血病干細胞的外泌體促進急性骨髓性白血病（AML）細胞的增殖、遷移和壓制細胞凋亡。治病靶標。利用外泌體遞送小干擾RNA來沉默KRASG12D，從而特異性高效靶向至胰腺病細胞，以明顯降低RAS活化、病細胞增殖和轉(zhuǎn)移過程。免疫。β細胞將含有蛋白質(zhì)和miRNA的外泌體釋放到細胞外，并可轉(zhuǎn)移到其他代謝部位或免疫內(nèi)皮細胞，有利于維持葡萄糖體內(nèi)平衡或造成胰島素抵抗。心血管。外泌體介導(dǎo)miR-155從平滑肌細胞轉(zhuǎn)移到內(nèi)皮細胞導(dǎo)致了內(nèi)皮細胞的損傷促進動脈硬化。分子標記。疾病診斷。在酒精性肝病、NASH、菌類性肝炎、藥物性肝損傷和肝細胞病中發(fā)現(xiàn)循環(huán)EVs的水平上升。預(yù)后標志使用可截留100KD分子量的膜，通過離心截留上清中的外泌體，截留完成后。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法，這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標準，也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心，這種操作簡單、省時，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準備工作繁雜，耗時，量少。外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點技術(shù)已被許多臨床科研機構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷外泌體提取：在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層。南京正規(guī)外泌體提取試劑

離心除去細胞器，留取上清。昆明外泌體提取試劑哪家便宜

密度梯度離心法該方法由于比較繁瑣，用的較少。原理是：像所有的脂質(zhì)小囊泡一樣，外泌體可以懸浮于特定密度梯度的蔗糖中，其密度范圍1.13g/ml-1.21g/ml，將要分離外泌體的樣本液體置于梯度蔗糖介質(zhì)上，隨后通過離心將外泌體分離。此法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣，耗時，對離心時間極為敏感。具體步驟是：收集培養(yǎng)2d的上清液。將培養(yǎng)上清液先以1500r/min離心5min除去細胞及碎片,再依次以1000×g離心10min取上清,10000×g離心30min取上清,然后用100ku超濾離心管(Millipore)濃縮至15mL,昆明外泌體提取試劑哪家便宜