細(xì)胞凍存步驟說明：配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液;取對數(shù)生長期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。去除PBS，加入適量胰蛋白酶(覆蓋培養(yǎng)皿表面)把單層生長的細(xì)胞消化下來;離心1000rpm，5min;去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計數(shù)，調(diào)節(jié)存液中細(xì)胞的較終密度為5×106/ml~1×107/ml;將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1~1.5ml;在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱，凍存時間及操作者;凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時，可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。度保存的無血清凍存液緩慢加入離心后的細(xì)胞沉淀中。正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液生產(chǎn)廠家

細(xì)胞凍存液是如何保護(hù)細(xì)胞的：當(dāng)溫度進(jìn)一步下降，細(xì)胞內(nèi)外都結(jié)冰，產(chǎn)生冰晶損傷。但是如果在溶液中加入冷凍保護(hù)劑，則可保護(hù)細(xì)胞免受溶質(zhì)損傷和冰晶損傷。因為冷凍保護(hù)劑容易同溶液中的水分子結(jié)合，從而降低冰點，減少冰晶的形成，并且通過其摩爾濃度降低未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度，使細(xì)胞免受溶質(zhì)損傷，細(xì)胞得以在較低溫條件下保存。在復(fù)蘇時，一般以很快的速度升溫，1-2分鐘內(nèi)即恢復(fù)到常溫，細(xì)胞內(nèi)外不會重新形成較大的冰晶，也不會暴露在高濃度的電解質(zhì)溶液中過長的時間，從而無冰晶損傷和溶質(zhì)損傷產(chǎn)生，凍存的細(xì)胞經(jīng)復(fù)蘇后仍保持其正常的結(jié)構(gòu)和功能。冷凍保護(hù)劑對細(xì)胞的冷凍保護(hù)效果還與冷凍速率、冷凍溫度和復(fù)溫速率有關(guān)。而且不同的冷凍保護(hù)劑其冷凍保護(hù)效果也不一樣。合肥無血清細(xì)胞凍存液供應(yīng)商無血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品性能：不含動物來源性蛋白，能減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染。

凍存溫度：凍存溫度是指能長期保存細(xì)胞的較低溫度，在此溫度下，細(xì)胞生化反應(yīng)極其緩慢甚至停止，但經(jīng)過長期保存，在復(fù)蘇后仍能保持正常的結(jié)構(gòu)和功能。不同的細(xì)胞和生物體以及使用不同的冷凍保存方法要取得同樣的冷凍保存效果，冷凍保存溫度可以不同。但從實際和效益的觀點出發(fā)，液氮溫度-196℃是目前較佳的冷凍保存溫度。在-196℃時，細(xì)胞的生命活動幾乎完全停止，但復(fù)蘇后細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能完好。如果冷凍過程得當(dāng)，一般生物樣品在-196℃下均可保存十年以上。應(yīng)用-70℃～-80℃保存細(xì)胞，短期內(nèi)對細(xì)胞的活性無明顯影響，但隨著凍存時間延長，細(xì)胞存活率明顯降低。在冰點到-40℃范圍內(nèi)保存細(xì)胞的效果不佳。

細(xì)胞凍存液常見問題：1.從繁衍期到產(chǎn)生高密度的單層細(xì)胞之前的塑造體細(xì)胞都能夠用以凍存，但較好是為多數(shù)成長期體細(xì)胞。在凍存前一日較好是換一次細(xì)胞培養(yǎng)液;2.將凍存管放進(jìn)液氮容器或從這當(dāng)中取下時，要搞好安全防護(hù)工作中，以防凍壞;3.凍存和再生較好用新配置的細(xì)胞培養(yǎng)液。細(xì)胞凍存的基本原理：細(xì)胞代謝過程需要各種蛋白酶的參與，而這些蛋白酶在環(huán)境溫度低于-70℃時會集體不工作，低溫貯藏的目的是通過較低溫使細(xì)胞代謝活動近乎停止。細(xì)胞因此進(jìn)入休眠狀態(tài)，使細(xì)胞“不會老”，所以可以長期保存。因為凍融過程對所有細(xì)胞和組織都是有一定傷害的，因此，需要開發(fā)出有效的技術(shù)來防止細(xì)胞死亡和損傷。無血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品性能：特別配方（主要成分為DMSO和氨基酸）有效提高細(xì)胞凍存活率和復(fù)蘇活力。

含血清細(xì)胞凍存液凍存細(xì)胞時遇到的問題：1.凍存細(xì)胞時需現(xiàn)配凍存液(如購買市面上通用的含血清細(xì)胞凍存液，此步可省略)。2.需要程序降溫（4℃→-20℃→-80℃→液氮），步驟繁瑣，耗時耗力。3.含血清，細(xì)胞污染(細(xì)菌、霉菌和支原體等)的風(fēng)險更高。4.血清批次、品質(zhì)間差異導(dǎo)致凍存液的批次間差異。5.需液氮凍存，且不能原位（如孔板）凍存。Cellregen無血清細(xì)胞凍存液是不含血清和動物源成分，含DMSO、糖類、氨基酸等成分的一款通用型細(xì)胞凍存液。Cellregen無血清細(xì)胞凍存液的凍存方法是：將細(xì)胞凍存懸液（凍存管或孔板）直接放置-80℃冰箱長期保存。含血清，細(xì)胞污染(細(xì)菌、霉菌和支原體等)的風(fēng)險更高。蘇州正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液單價

無血清細(xì)胞凍存液使用方法：取相當(dāng)于所需細(xì)胞數(shù)的細(xì)胞懸浮液量，置于離心管中。正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液生產(chǎn)廠家

無血清快速細(xì)胞凍存液凍存細(xì)胞復(fù)蘇方法：1、從冰箱里取出細(xì)胞冷凍保存管，立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍。2、待凍存管中細(xì)胞混合液完全融化后，立即加入1ml細(xì)胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細(xì)胞混合，再將細(xì)胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細(xì)胞培養(yǎng)基的試管中，混合均勻。3、離心收集培養(yǎng)細(xì)胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min），移去上清液。4、清洗細(xì)胞，充分洗凈殘留凍存液。5、加入適量的新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基，使用移液管緩緩地均勻細(xì)胞混合液。適量地稀釋后，將細(xì)胞混合液移至事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)瓶中。6、鏡檢后，研究者可根據(jù)各自方法和需要來進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液生產(chǎn)廠家