細(xì)胞活性的細(xì)胞增殖檢測(cè)方法，能檢測(cè)到細(xì)胞的總體增殖效果，但無(wú)法檢測(cè)到單個(gè)的增殖細(xì)胞。這幾種方法盡管都不是檢測(cè)DNA合成的，但被用于替代[3H]thymidine摻入法。CFDASE法(C0051、C1031)基于細(xì)胞熒光示蹤的原理能檢測(cè)到單個(gè)的增殖細(xì)胞，但由于每增殖一次熒光減弱一半，在熒光顯微鏡下較難區(qū)分熒光減弱一半的細(xì)胞，檢測(cè)靈敏度不是很高，通常適用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)。在進(jìn)行科學(xué)研究時(shí)，上述這些基于細(xì)胞活性或CFDASE的方法可以作為EdU法的補(bǔ)充性檢測(cè)方法。上海東寰告訴您如何正確使用EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒？河北哪家公司提供EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒原理

4%多聚甲醛固定液或冷**固定液(-20℃預(yù)冷20min)。d,封閉液。e,／LPBS緩沖液。2、染色方法a,取出培養(yǎng)有細(xì)胞的蓋玻片，用洗2-3遍。b,加入4%多聚甲醛試問(wèn)固定30minc.加入的Tritonx-100,37℃,5min，PBS洗兩次，5min/次d.加入含、1%BSA的PBS中室溫封閉30min-1h。e.去封閉液，直接加入一抗，37℃孵育1h或4℃過(guò)夜?？贵w以mo/LPBS稀釋(理想的抗體濃度需經(jīng)試驗(yàn)而定)。，10min/次g.加入FITC-二抗或TRITC-二抗，37℃，孵育1h。，10min/次，用濾紙吸干。(PBS配制)封片。j.免疫熒光顯微鏡下觀察，或于4℃避光保存。免疫熒光雙標(biāo)記方法免疫熒光的雙標(biāo)記是指同時(shí)標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)兩種蛋白質(zhì)分子，當(dāng)懷疑某種配體與已知受體結(jié)合后可用此方法加以證明。此方法稍微復(fù)雜一些，應(yīng)注意所用的一抗是來(lái)自不同種屬動(dòng)物的兩種特異性抗體(例如：A抗體為多克隆抗體，來(lái)自家兔；B抗體為單克隆抗體，來(lái)自小鼠)。其次，兩種二抗所帶熒光素的發(fā)射光不應(yīng)重疊，且盡量遠(yuǎn)離，通?？梢赃x擇FITC和TRITC、Alex488和TRITC、FITC和Cy5，或Cy3和Cy5等來(lái)組合。通常情況下，染色時(shí)兩種一抗可以同時(shí)孵育，然后可以同時(shí)孵育兩種二抗。但當(dāng)染色結(jié)果一種顏色非常弱，而另一種顏色比較強(qiáng)時(shí)，應(yīng)考慮先孵育顏色較弱的二抗。河北哪家公司提供EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒原理EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒使用時(shí)的注意事項(xiàng)。

上海東寰生物科技有限公司即核苷滲入法。以前常用的核苷滲入法是BrdU(胸腺嘧啶核苷酸類(lèi)似物)法，但BrdU法的缺點(diǎn)是需要變性DNA后才能與抗體結(jié)合，導(dǎo)致了DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的破壞，影響了其他染料的結(jié)合染色，導(dǎo)致染色彌散，準(zhǔn)確性降低等問(wèn)題。EdU法作為新型的核苷滲入法具有以下優(yōu)點(diǎn)：安全—–不使用[3H]thymidine，無(wú)放射性污染。簡(jiǎn)單—–基于小分子化學(xué)反應(yīng)的檢測(cè)方法，簡(jiǎn)單高效，需三步：EdU孵育；細(xì)胞固定；熒光檢測(cè)。無(wú)需DNA變性和孵育抗體。

EU新生RNA檢測(cè)試劑產(chǎn)品簡(jiǎn)介細(xì)胞內(nèi)新生RNA的變化是評(píng)價(jià)細(xì)胞活性的重要指標(biāo)。EU(5-Ethynyl-Uridine)是一種尿嘧啶核苷類(lèi)似物,能夠在細(xì)胞RNA轉(zhuǎn)錄時(shí)期代替尿嘧啶(U)摻入新合成的RNA分子中,然后通過(guò)基于EU與熒光染料的特異性共軛反應(yīng)，把熒光集團(tuán)標(biāo)記到新合成的含有EU的RNA分子中，這樣就可以進(jìn)行較快的的熒光檢測(cè)RNA的轉(zhuǎn)錄活性。本試劑盒將直接測(cè)定細(xì)胞內(nèi)新生RNA的變化。傳統(tǒng)的檢測(cè)新生RNA的方法為以放射性同位素標(biāo)記RNA等方法然后進(jìn)行Southernblot進(jìn)行檢測(cè)。但是這種方法需要放射性同位素標(biāo)記及后續(xù)的復(fù)雜操作步驟。利用EU標(biāo)記新生RNA的檢測(cè)方法不需要?jiǎng)×业腞NA變性，只需溫和的細(xì)胞固定化和透化處理，能夠較好地保護(hù)細(xì)胞形態(tài)、RNA整體結(jié)構(gòu)及細(xì)胞內(nèi)抗原識(shí)別位點(diǎn)，操作步驟更加便捷、靈敏和準(zhǔn)確，能在細(xì)胞水**映新生RNA轉(zhuǎn)錄活性的狀況。該試劑只需要簡(jiǎn)單的操作步驟，適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡以及高內(nèi)涵篩選儀進(jìn)行新生RNA的轉(zhuǎn)錄活性。試劑組分產(chǎn)品編號(hào)試劑濃度試劑量C01901EU溶液1000×40μl細(xì)胞固定液1×15ml反應(yīng)緩沖液10×1ml催化劑溶液25×400μlTAMRA紅色熒光溶液400×25μl緩沖添加劑粉末200mgHoechst×20μl運(yùn)輸及保存方式藍(lán)冰運(yùn)輸。-20℃避光長(zhǎng)期保存。上海東寰告訴您使用EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的便捷性。

EdU是一種胸腺嘧啶核苷類(lèi)似物，分子量很小，在動(dòng)物體內(nèi)能夠迅速擴(kuò)散到各種組織和中，并滲入正在復(fù)制的DNA分子，通過(guò)基于Apollo®熒光染料與EdU的特異性反應(yīng)即可簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)出細(xì)胞增殖情況。與BrdU檢測(cè)方法相比，EdU檢測(cè)方法用量小得多，十分之一的用量即可獲得與BrdU檢測(cè)試劑盒相同甚至更好的檢測(cè)結(jié)果，而且小分子化學(xué)反應(yīng)檢測(cè)方法反應(yīng)快，效率高，反應(yīng)時(shí)間需幾分鐘，不需要DNA變性、蛋白酶處理、抗原抗體過(guò)夜孵育，能夠更好地保護(hù)細(xì)胞形態(tài)，更簡(jiǎn)單、更靈敏、更快速、更準(zhǔn)確。使用EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒到底有什么好處？安徽品質(zhì)好的EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒公司

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EdU標(biāo)記(a)將細(xì)胞完全培養(yǎng)基中按照500:1的比例加入EdU溶液，制成2xEdU標(biāo)記培養(yǎng)基；(b)提前將2xEdU標(biāo)記培養(yǎng)基預(yù)熱，然后等體積加入到細(xì)胞原有培養(yǎng)基中，獲得lxEdU溶液，其中EdU的終濃度為10uM；注：1)我們不建議替換全部培養(yǎng)基，因?yàn)檫@樣可能會(huì)影響細(xì)胞增殖的速度；2)配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒(méi)過(guò)細(xì)胞為宜；(c)每孔加入300ul含EdU培養(yǎng)基孵育細(xì)胞2小時(shí)，棄培養(yǎng)基；注：1)培養(yǎng)時(shí)間取決于細(xì)胞的增殖速度和生長(zhǎng)狀態(tài)；2)大多數(shù)**細(xì)胞以及粘附細(xì)胞系均可采用2小時(shí)的孵育時(shí)間(d)以lxPBS清洗細(xì)胞兩次，毎次5分鐘，以除去未摻入DNA的EdU殘留。注：貼壁不牢的細(xì)胞可降低清洗強(qiáng)度河北哪家公司提供EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒原理