TAMRA(四甲基羅丹明)常作為熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)中的淬滅基團與其他熒光基團搭配使用,如與 FAM 等供體染料配合。當(dāng)供體染料被激發(fā)時,能量會轉(zhuǎn)移到 TAMRA 上并以非熒光形式耗散,從而實現(xiàn)對熒光信號的調(diào)控。在熒光定量 PCR 中,常利用這種能量轉(zhuǎn)移機制來檢測 PCR 產(chǎn)物的生成。例如,在 TaqMan 探針中,F(xiàn)AM 標(biāo)記在探針的 5' 端,TAMRA 標(biāo)記在 3' 端,當(dāng)探針完整時,F(xiàn)AM 的熒光被 TAMRA 淬滅;而在 PCR 延伸過程中,Taq 酶的 5' - 3' 外切酶活性會將探針?biāo)?,?FAM 與 TAMRA 分離,F(xiàn)AM 熒光恢復(fù),從而實現(xiàn)對 PCR 產(chǎn)物的定量檢測。特點:激發(fā)波長約為 550nm,發(fā)射波長約為 580nm,熒光顏色為紅色。TAMRA 具有較好的光穩(wěn)定性和較高的量子產(chǎn)率,能夠產(chǎn)生較強的熒光信號,并且與許多常用的熒光基團具有良好的光譜兼容性,適用于多種熒光檢測平臺。而熒光探測器則能夠準(zhǔn)確地捕捉到這些微弱的熒光信號,并將其轉(zhuǎn)化為電信號或數(shù)字信號進(jìn)行分析。無錫熒光定量PCR儀詢問報價
ROX通常并不指代一種特定的熒光定量PCR儀,而是一種熒光染料,在熒光定量PCR中常被用作被動參考染料。其作用是用于校正熒光信號,減少孔與孔之間由于加樣誤差、反應(yīng)體積差異、光學(xué)系統(tǒng)的微小變化以及蒸發(fā)等因素導(dǎo)致的熒光信號波動,提高實驗的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。在實時熒光定量PCR儀的使用中,很多儀器都可以兼容ROX染料進(jìn)行信號校正。例如,賽默飛世爾的QuantStudio系列、ABI的7500、7900等型號的熒光定量PCR儀都支持ROX染料。不同的熒光定量PCR儀在檢測通道、光學(xué)系統(tǒng)、熱循環(huán)性能等方面存在差異,但只要其具備相應(yīng)的熒光檢測通道,能夠檢測ROX染料的熒光信號,并在軟件中支持以ROX信號作為參考進(jìn)行數(shù)據(jù)校正,就可以在實驗中使用ROX染料來輔助提高定量分析的準(zhǔn)確性。例如,QuantStudio1實時熒光定量PCR儀采用新型Optiflex光學(xué)檢測架構(gòu),提供FAM、VIC和ROX三種常用激發(fā)和發(fā)射濾光片,實現(xiàn)3重實時定量分析。南京TET熒光定量PCR儀廠家通過檢測孕婦外周血中的胎兒游離 DNA 或羊水、絨毛等樣本中的胎兒基因,可對胎兒進(jìn)行遺傳性疾病的早期診斷。
熒光定量 PCR 儀應(yīng)用領(lǐng)域:基礎(chǔ)科研基因表達(dá)分析:研究特定基因在不同組織、細(xì)胞以及不同生理狀態(tài)或處理條件下的表達(dá)水平,有助于深入理解基因的功能和調(diào)控機制。基因功能研究:通過定量分析基因表達(dá)的變化,探討基因在細(xì)胞增殖、分化、凋亡等過程中的作用,以及基因之間的相互調(diào)控關(guān)系。農(nóng)業(yè)研究:作物遺傳改良:檢測植物基因組中的突變和表達(dá)量變化,評估作物的生長發(fā)育情況和適應(yīng)性,為作物品種選育和遺傳改良提供依據(jù)。植物病蟲害檢測:快速檢測植物病原體,如病毒、細(xì)菌、等,有助于及時采取防治措施,保障農(nóng)作物產(chǎn)量和質(zhì)量。
熒光定量PCR儀的檢測結(jié)果會受到多種因素的影響,包括儀器設(shè)備、試劑質(zhì)量、樣本處理以及實驗操作等方面,以下是具體介紹:儀器設(shè)備因素?zé)嵫h(huán)系統(tǒng):熱循環(huán)的準(zhǔn)確性和均勻性至關(guān)重要。如果熱循環(huán)過程中溫度控制不準(zhǔn)確,如實際溫度與設(shè)定溫度存在偏差,會導(dǎo)致PCR反應(yīng)效率不穩(wěn)定,影響擴增產(chǎn)物的產(chǎn)量和質(zhì)量,進(jìn)而使檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。不均勻的溫度分布會使不同反應(yīng)孔之間的擴增效果產(chǎn)生差異,增加實驗誤差。熒光檢測系統(tǒng):熒光檢測的靈敏度和準(zhǔn)確性直接影響結(jié)果。儀器的光學(xué)部件性能不佳,如激發(fā)光源強度不足、熒光信號收集效率低,可能導(dǎo)致弱熒光信號無法被準(zhǔn)確檢測到,影響對低拷貝數(shù)模板的定量分析。此外,熒光檢測通道之間的串?dāng)_也會干擾信號的準(zhǔn)確測量,造成結(jié)果偏差。能夠準(zhǔn)確檢測食品中的轉(zhuǎn)基因成分,通過對轉(zhuǎn)基因作物中特定的基因序列進(jìn)行定量分析;
你可能想說的是 “實時熒光定量 PCR 儀”。實時熒光定量 PCR 儀是一種用于對核酸進(jìn)行定量分析的儀器,在醫(yī)學(xué)、生物學(xué)等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。工作原理實時熒光定量 PCR 儀基于 PCR 技術(shù),在 PCR 反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個 PCR 進(jìn)程,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析。例如,常用的 SYBR Green I 染料,在游離狀態(tài)下熒光微弱,與雙鏈 DNA 結(jié)合后熒光明顯增強,隨著 PCR 產(chǎn)物的合成,熒光信號不斷增加,儀器可實時檢測到這種變化。TET 熒光定量 PCR 儀的熱循環(huán)系統(tǒng)能夠準(zhǔn)確地控制溫度的升降速率和保溫時間,PCR 反應(yīng)在溫度條件下進(jìn)行。泰州VIC熒光定量PCR儀微量檢測
升降溫速度慢則會使實驗時間延長,也可能影響擴增效率。無錫熒光定量PCR儀詢問報價
熒光定量 PCR 儀的檢測結(jié)果會受到多種因素的影響,包括儀器設(shè)備、試劑質(zhì)量、樣本處理以及實驗操作等方面,以下是具體介紹:樣本處理因素樣本采集:樣本采集的部位、時間和方法不當(dāng)都可能影響檢測結(jié)果。例如,采集的樣本量不足、未采集到病變部位的細(xì)胞,或者樣本被污染,都可能導(dǎo)致檢測到的目標(biāo)核酸含量不準(zhǔn)確,出現(xiàn)假陰性或假陽性結(jié)果。核酸提取:核酸提取的質(zhì)量和效率直接關(guān)系到后續(xù)檢測。提取過程中若核酸被降解,會使模板量減少,導(dǎo)致定量結(jié)果偏低。此外,提取的核酸中若含有蛋白質(zhì)、多糖等雜質(zhì),也會抑制 PCR 反應(yīng),影響擴增效果和檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。無錫熒光定量PCR儀詢問報價