而是對于所有能夠產生螢光的底物和其對應的酶的統(tǒng)稱,雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的螢光素酶來催化不同的發(fā)光反應。**為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲,而其所采用不同的螢光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇(發(fā)光類臍菇,Omphalotusolearius)或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中,發(fā)光反應所需的氧氣是從被稱為腹部氣管(abdominaltrachea)的管道中輸入。一些生物,如叩頭蟲,含有多種不同的螢光素酶,能夠催化同一螢光素底物,而發(fā)出不同顏色的螢光。螢火蟲有2000多種,而叩甲總科(包括螢火蟲、叩頭蟲和相關昆蟲)則有更多,因此它們的螢光素酶對于分子系統(tǒng)學研究很有用。如今研究得**透徹的螢光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲(Photinuspyralis)。[1]螢光素酶可以在實驗室中用基因工程的方法生成,并被用于多種不同的實驗。螢光素酶的基因可以被合成并插入到生物體中或轉染到細胞中。研究者利用基因工程已經使得小鼠、家蠶、馬鈴薯等一些生物可以合成螢光素酶。間接體外成像是一種強大的研究手段,可以對整個動物體中的細胞群落進行分析:將不同類型的細胞(骨髓干細胞、T細胞等)標記上(即表達)螢光素酶。D-熒光素鉀鹽的配置是什么?蘇州專業(yè)做D-熒光素鉀鹽活題成像
產品描述D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍應用于整個生物技術領域,特別是體內***成像技術。其作用機制是在ATP和熒光素酶的作用下,熒光素底物能夠被氧化發(fā)光。當熒光素過量時,產生的光量子數與熒光素酶的濃度呈正相關性(見下圖)。將攜帶熒光素酶編碼基因(Luc)的慢病毒轉染入細胞后構建穩(wěn)定表達細胞株,構建原位**模型,之后注入熒光素底物,通過IVIS系統(tǒng)來檢測光強度變化,從而實時監(jiān)測疾病發(fā)展狀態(tài)或進行藥物藥效評價等。也可以利用ATP對此反應體系的影響,根據生物發(fā)光強度的變化來指示能量或生命體征。注:在抗**藥物藥效評價試驗中,由于生物自發(fā)光檢測需要根據熒光素表達標定**大小,受**生長所發(fā)生的**內部壞死影響,生物自發(fā)光并不能很***的評價**生長,在抗**藥效評價有較高要求的實驗中,建議使用小動物核磁成像系統(tǒng)檢測**生長。D-熒光素也常用于體外研究,包括熒光素酶和ATP水平分析;報告基因分析;高通量測序和各種污染檢測。目前有三種產品形式:D-熒光素(游離酸),D-熒光素鹽(鈉鹽和鉀鹽)。主要差別在于溶解特性:前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液??扇苡诩状己虳MSO。 螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽溶液怎么保存ATP作用下的D-熒光素鉀鹽什么樣。
包括熒光素酶和ATP水平分析;報告基因分析;高通量測序和各種污染檢測。目前有三種產品形式:D-熒光素(游離酸),D-熒光素鹽(鈉鹽和鉀鹽)。主要差別在于溶解特性:前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液。可溶于甲醇和DMSO;后者能夠易溶于水或緩沖液中,使用方便,溶劑無毒性,特別適合體內實驗。配成溶液后的這三種產品,在絕大多數的應用上都沒有實質性的差別。產品性質運輸和保存運輸條件:4℃冰袋運輸;短期保存:4℃干燥避光長期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期長期保存:有效期一年工作液:先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1)用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,配制成30mg/mL的儲存液(100-200×),混勻。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復凍融。2)用預熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3)去除細胞培養(yǎng)基。4)待圖像分析前,向細胞內添加熒光素工作液,37℃孵育5-10min,然后進行圖像分析。2.活題成像分析1)用無菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液,混勻。2)用μm濾膜過濾除菌。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復凍融。3)腹腔注射(.)。
LAR)Promega公司推出的第一種螢光素酶檢測試劑LuciferaseAssaySystem(LAR),為靈敏、非放射性的報告基因檢測拉開了序幕。LAR與螢火蟲螢光素酶(luc)報告基因一起,為研究人員開始了解基因表達調控因子提供了首要的工具。[1]1995Dual-Luciferase?報告基因檢測系統(tǒng)(DLR)DLR是第一種允許在單個樣本中依次檢測兩個報告基因的試劑。通過允許螢光素酶活性的內部歸一化,在提高報告基因檢測的可靠性方面取得了關鍵進展。此外,pGL3報告基因載體系列具有改良后的螢火蟲螢光素酶基因,luc+。這個改造一種報告基因以實現(xiàn)性能改進的例子后來被進一步應用到pGL4和luc2報告基因上,通過生物信息學和合成方法,實現(xiàn)了更大的改進。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重組螢光素酶Promega公司在早期推出的一種重組螢火蟲螢光素酶(Enliten)基礎上,改造出了一種稱為UltraGlo?的熱穩(wěn)定性螢光素酶。UltraGlo?的開發(fā)是在各種檢測和儲藏條件下進行一步法“加樣-讀數”檢測的關鍵。此后,通過開發(fā)新的方法來改變螢火蟲螢光素酶檢測的信號動力學,例如Bright-Glo?、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進行檢測。而“加樣-讀數”的形式簡化了樣品處理。南京翌科生物科技有限公司的D-熒光素鉀鹽測試怎么樣?
隨后30年里,Promega不斷在螢光素酶實驗工具領域推陳出新,保持技術帶跑的人的地位。這里提到的螢光素酶即熒光素酶。1991螢光素酶檢測系統(tǒng)(LAR)Promega公司推出的7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3螢光素酶檢測試劑LuciferaseAssaySystem(LAR),為靈敏、非放射性的報告基因檢測拉開了序幕。LAR與螢火蟲螢光素酶(luc)報告基因一起,為研究人員開始了解基因表達調控因子提供了首要的工具。1995Dual-Luciferase?報告基因檢測系統(tǒng)(DLR)DLR是7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3允許在單個樣本中依次檢測兩個報告基因的試劑。通過允許螢光素酶活性的內部歸一化,在提高報告基因檢測的可靠性方面取得了關鍵進展。此外,pGL3報告基因載體系列具有改良后的螢火蟲螢光素酶基因,luc+。這個改造一種報告基因以實現(xiàn)性能改進的例子后來被進一步應用到pGL4和luc2報告基因上,通過生物信息學和合成方法,實現(xiàn)了更大的改進。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重組螢光素酶Promega公司在早期推出的一種重組螢火蟲螢光素酶(Enliten)基礎上,改造出了一種稱為UltraGlo?的熱穩(wěn)定性螢光素酶。UltraGlo?的開發(fā)是在各種檢測和儲藏條件下進行一步法“加樣-讀數”檢測的關鍵。此后。做D-熒光素鉀鹽測試價格是多少。泰州熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽生物公司
D-熒光素鉀鹽適用于哪些領域?蘇州專業(yè)做D-熒光素鉀鹽活題成像
常見的熒光素酶有兩種,分別是螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase,編碼基因是luc)和海腎熒光素酶(Renillaluciferase,編碼基因是Rluc),前者的底物是D-Luciferin,后者的底物是Coelenterazine。它們共同的作用原理是在ATP和熒光素酶的催化作用下,底物被氧化發(fā)光(不同底物光的顏色和波長不同),當底物過量時,產生的光量子數與熒光素酶的濃度呈正相關性。***成像技術(opticalinvivoimaging)目前主要采用生物發(fā)光(bioluminescence)與熒光(fluorescence)兩種技術,生物發(fā)光法是基于熒光素酶能催化底物(D-Luciferin或Coelenterazine)化學發(fā)光的原理,將體外能穩(wěn)定表達熒光素酶的細胞株植入動物體內,與后期注射入體內的底物發(fā)生反應,利用光學系統(tǒng)檢測光強度,間接反映出細胞數量的變化或細胞的定位。這項技術已被廣泛應用于多個領域常用的有**或疾病動物模型的建立,并可用于病毒學研究、siRNA研究、干細胞研究、蛋白質相互作用研究等。以下主要介紹D-Luciferin(D熒光素)的分類:D-Luciferin:有三種,分別是D-Luciferin,SodiumSalt/D熒光素鈉鹽、D-Luciferin,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽和D-LuciferinFirefly,freeacid/D-螢火蟲熒光素。蘇州專業(yè)做D-熒光素鉀鹽活題成像
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