HE染色常見問題：切片染色不均勻，有片狀的弱著**存在答：（1）取材時組織太厚，固定過久，導(dǎo)致深部組織固定不佳，而表淺組織過度固定，而透明、脫水、浸蠟均是如此，這樣在后期染色時就會出現(xiàn)染色不均勻。應(yīng)該將厚的組織剖開固定。（2）制片過程有問題，切片厚薄不一，或者有刀痕，或組織與玻片間存在氣泡。同一張切片厚薄不一，一般都是在制片時，刀片固定不佳或刀片鈍或刀片與組織角度不佳（一般比較好角度為5°）（3）脫蠟前未烘烤，脫蠟時間過短或脫蠟液使用過久，導(dǎo)致脫蠟不徹底。（4）染色液過少，著色不均勻；或染色時部分組織干涸而另一部分濕潤，這樣會導(dǎo)致組織吸附染料的能力不一。（5）分化不當(dāng)。南京英瀚斯，專業(yè)的病理染色實驗服務(wù)平臺。南京英瀚斯，專業(yè)的技術(shù)提供專業(yè)的HE染色服務(wù)。安徽值得信賴的HE染色分析

HE染色伊紅溶液中加入少量的冰醋酸(一般小于10%就行)，可改變組織等電點(diǎn)，促進(jìn)伊紅與胞漿蛋白質(zhì)結(jié)合，其本身不參與染色的反應(yīng)。當(dāng)蘇木素染色效能極高，很短時間就導(dǎo)致核漿共染時，可適當(dāng)?shù)靥砑颖姿?一般不超過2%)，抑制蘇木素染色效能，方便控制染色時間，同時也能提高蘇木素染色的清晰度?，F(xiàn)在有商用的HE染色液賣，但是質(zhì)量參差不齊。如果課題組較大，完全可以自己配制，效果也挺好。配制為乙酸濃度5%-7.5%和鹽酸濃度為0.5%-1%的蘇木素溶液放置一周，即可完全成熟，染色效果好，氧化膜和結(jié)晶都很少(一般蘇木素中酸度越低越容易產(chǎn)生氧化膜和結(jié)晶，這也是提示更換蘇木素的標(biāo)志之一)。甘肅專業(yè)的HE染色分析常用HE染色試劑配制方法。

HE染色原理：一、細(xì)胞核染色原理：蘇木精為堿性天然染料，可使細(xì)胞核著色。細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA，在DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外。使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性燃料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍(lán)色，所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。二、細(xì)胞漿染色原理：細(xì)胞漿內(nèi)主要成分是蛋白質(zhì)，為兩性化合物、細(xì)胞漿的染色與pH值有密切關(guān)系，當(dāng)pH調(diào)到蛋白質(zhì)等電點(diǎn)4.7-5.0時，胞漿對外不顯電性，此時酸或堿性染料不易染色。當(dāng)pH調(diào)到6.7-6.8時，大于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)pH值，表現(xiàn)酸性電離，而帶負(fù)電荷的陰離子，可被帶正電荷的染料染色，現(xiàn)時胞核也被染色，核和胞漿難以區(qū)分。因此必須把pH調(diào)至胞漿等電點(diǎn)以下，在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷（陽離子），就可被帶負(fù)電荷（陰離子）的染料染色。伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料，在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子，與蛋白質(zhì)的氨基正電荷（陽離子）結(jié)合而使細(xì)胞漿染色，細(xì)胞漿、紅細(xì)胞、肌肉、結(jié)締組織，嗜伊紅顆料等被***成不同程度的紅色或粉紅色，與藍(lán)色的細(xì)胞核形成鮮明的對比

HE染色多聚甲醛保存組織的注意事項：多聚甲醛放置過久其中的醛基可能會被氧化為酸，使溶液pH降低，從而影響染色。不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時間有所不同，應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。多聚甲醛雖然作用溫和，但能硬化組織，固定時間過久會導(dǎo)致組織變脆，切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過24小時。多聚甲醛可長期存在于固定過的細(xì)胞或組織樣品中，固定完成后用適當(dāng)?shù)南礈煲夯蛩疀_洗數(shù)小時仍會有殘留，因此后續(xù)實驗結(jié)果如果受醛基影響，須盡量洗去殘留的多聚甲醛。醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結(jié)果。因此，4%多聚甲醛固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測時，有時需要對抗原先進(jìn)行修復(fù)，然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。骨組織HE染色的操作流程。

HE染色病理技術(shù)中**常用的一種方法，通過它可以做出病理診斷和發(fā)現(xiàn)尋求別的輔助方法，以達(dá)到準(zhǔn)確，完整的病理診斷。一、染色目的 病理學(xué)的所有切片，都必須通過一種以上的染料，通過各種不同的方法，將切片中各種不同的物質(zhì)，在不同染液的作用下，將其顯示出來，使之在光學(xué)顯微鏡下，能夠完全的觀看各種結(jié)構(gòu)。例如，HE染色，好質(zhì)量的切片可以清晰地顯示出多不同的結(jié)構(gòu)，細(xì)胞核著藍(lán)黑色，細(xì)胞漿著粉紅色，軟骨著藍(lán)色等。清晰的結(jié)構(gòu)為診斷提供的依據(jù)，因此，染色技術(shù)也是病理技術(shù)中的重要組成部分，必須不斷地總結(jié)，方能提高。HE染色，一站式實驗外包服務(wù)平臺。貴州靠譜的HE染色公司

HE染色，即是蘇木精-伊紅染色法，是形態(tài)學(xué)比較常用的染色方法。安徽值得信賴的HE染色分析

HE染色注意事項：1、染色時調(diào)節(jié)pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時間長，組織酸化而影響細(xì)胞核著色。因此，要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min，這樣可以使細(xì)胞核著色較深。染伊紅時胞漿著色不佳，可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。2、切片染蘇木精后，分色這一步是關(guān)鍵，應(yīng)在顯微鏡下控制進(jìn)行，一般以細(xì)胞核染色清楚（晰）而細(xì)胞質(zhì)基本無色為佳。如果過分延長分色時間將導(dǎo)致染色太淺，應(yīng)重新染色后再行分色。3、切片經(jīng)酒精脫水后，入二甲苯時可出現(xiàn)白色不透明狀態(tài)，此為脫水不徹底，應(yīng)將切片退回?zé)o水酒精，更換酒精、二甲苯，以求徹底脫水與透明。4、在染色過程中不要讓切片干燥，以免切片收縮、變形，影響神經(jīng)元形態(tài)。5、切片從二甲苯取出或進(jìn)入二甲苯前，切片周邊均應(yīng)擦干凈或吸干多余水分。6、***封固時，要用中性樹脂，防止日后褪色，蓋片要選大于組織塊的面積，如漏出一部分不久將會褪色，所用樹脂濃度要適當(dāng)，樹脂封固時不能有氣泡。安徽值得信賴的HE染色分析