建立疾病模型的目的是為了防治人類疾病。因此，疾病模型研究結(jié)果的可靠程度取決于模型與人類疾病的相似或可比擬的程度。接下來就讓上海研錄帶您了解相關(guān)知識(shí)。一個(gè)好的疾病模型應(yīng)具有以下特點(diǎn)：①能夠再現(xiàn)所要研究的人類疾病，動(dòng)物疾病表現(xiàn)應(yīng)該與人類疾病相似；②動(dòng)物能重復(fù)產(chǎn)生該疾病，盡可能能在兩種動(dòng)物體內(nèi)復(fù)制該??；③動(dòng)物背景資料完整，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格，生命周期要滿足實(shí)驗(yàn)需要;④動(dòng)物要價(jià)廉、來源充足、便于運(yùn)送；⑤盡可能選用小動(dòng)物。生物醫(yī)學(xué)科研專業(yè)設(shè)計(jì)中常要考慮如何建立動(dòng)物模型的問題，因?yàn)楹芏嚓U明疾病及療效機(jī)制的實(shí)驗(yàn)不可能或不應(yīng)該在患者身上進(jìn)行。常要依賴于復(fù)制動(dòng)物模型，但一定要進(jìn)行周密設(shè)計(jì)，設(shè)計(jì)時(shí)要遵循下列一些原則：(一)相似性在動(dòng)物身上復(fù)制人類疾病模型，目的在于從中找出可以推演應(yīng)用于患者的有關(guān)規(guī)律。外推法(extrapolation)要冒風(fēng)險(xiǎn)，因?yàn)閯?dòng)物與人到底不是一種生物。如，在動(dòng)物身上無效的藥物不等于臨床無效，反之亦然。因此，設(shè)計(jì)動(dòng)物疾病模型的一個(gè)重要原則是，所復(fù)制的模型應(yīng)盡可能近似于人類疾病的情況。能夠找到與人類疾病相同的動(dòng)物自發(fā)性疾病當(dāng)然是比較好的。(二)重復(fù)性理想的動(dòng)物模型應(yīng)該是可重復(fù)的，甚至是可以標(biāo)準(zhǔn)化的。如?？蒲行“兹绾蚊髯约旱念A(yù)實(shí)驗(yàn)。云南科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)室

m6A修飾圖譜構(gòu)建及作用機(jī)制：通過m6A甲基化測序（MeRIP-Seq,miCLIP）構(gòu)建疾病細(xì)胞模型或者發(fā)病組織的m6A修飾譜，分析m6A的motif,peaks數(shù)量及分布，Peak關(guān)聯(lián)基因的特征，聯(lián)合RNA-seq研究m6A甲基化與表達(dá)的關(guān)系。m6A研究思路方案一方案二研究案例1、.(IF=)為研究ALKBH5的m6A作用機(jī)制，作者利用芯片和m6A-seq篩選到膠質(zhì)瘤增殖相關(guān)的FOXM1，通過qPCR、WB、免疫熒光、核質(zhì)分離WB/qPCR、RIP和MeRIP等實(shí)驗(yàn)證明ALKBH5通過去甲基化調(diào)節(jié)FOXM1在GSCs中的表達(dá)。為研究ALKBH5對(duì)FOXM1的作用是否受其他因子的調(diào)節(jié)，作者研究了FOXM1的鄰近基因，發(fā)現(xiàn)lncRNAFOXM1-AS與FOXM1序列互補(bǔ)，且共表達(dá)、共定位，進(jìn)一步通過RIP,RNApulldown等實(shí)驗(yàn)證明lncRNAFOXM1-AS促進(jìn)ALKBH5和FOXM1初級(jí)轉(zhuǎn)錄本的相互作用。通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證ALKBH5在lncRNAFOXM1-AS的作用下維持FOXM1的表達(dá)和細(xì)胞增殖，從而維持GSCs的干性。圖3ALKBH5敲除細(xì)胞中m6A修飾的特征和基因表達(dá)的變化2、RNAN6-methyladenosinemethyltransferaseMETTL3promoteslivercancerprogressionHepatology,2017.(IF=)表觀遺傳改變極大地促進(jìn)了人類癥的發(fā)生。傳統(tǒng)的表觀遺傳研究主要集中在DNA甲基化，組蛋白修飾和染色質(zhì)重構(gòu)。近。貴州實(shí)驗(yàn)科研技術(shù)服務(wù)培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)干貨 | 分子克隆實(shí)驗(yàn)——無縫克隆。

靜置25分鐘后把酒精倒干，用吸水紙吸出多余的酒精，然后配壓縮膠，同樣的操作，關(guān)鍵是梳子要插得快，要小心梳子下產(chǎn)生氣泡，然后靜置30分鐘。如果是當(dāng)天跑膠，我會(huì)等上層膠凝2個(gè)小時(shí)再用，但要注意防干燥縮水，可以在一個(gè)小時(shí)的時(shí)候沿著梳子上緣加點(diǎn)電泳液。所以我一般提前一晚制膠，泡于純水或者電泳液里置于4度冰箱暫存。三、蛋白電泳1、上樣前準(zhǔn)備把膠組裝到電泳芯上，注意密閉性(否則漏液)，如果內(nèi)槽漏液就不是勻強(qiáng)電場了，條帶可能就不是一條直線。然后內(nèi)槽倒?jié)M電泳液，拔梳子，這一步要小心，梳子要兩邊一起緩緩?fù)习纬?，然后觀察泳道內(nèi)有無脫落的膠?；蛘吣z絲，有的話用1毫升注射器吸出。然后從冰箱取出蛋白樣品，解凍。準(zhǔn)備振蕩器。2、上樣和電泳注意，上樣后蛋白會(huì)開始慢慢在膠中彌散，所以上樣越快越好。我習(xí)慣先上蛋白Marker,再上蛋白樣品，蛋白上樣前確保樣品完全解凍和充分振蕩(推薦使用振蕩器振蕩)，吸的時(shí)候沒有拉絲即可，建議上樣分鐘把樣品從冰上取出來，不然樣品中SDS可能會(huì)結(jié)晶析出，從而影響電泳效果。上層膠80V25分鐘，下層膠120V65分鐘。四、轉(zhuǎn)膜1、轉(zhuǎn)膜前準(zhǔn)備我會(huì)在電泳結(jié)束0分鐘準(zhǔn)備，把轉(zhuǎn)膜液配好置于4度冰箱預(yù)冷，然后裁膜，準(zhǔn)備轉(zhuǎn)膜裝置。

是整體甲基化進(jìn)程所必須的[2]。FTO是ALKB家族的成員，作為個(gè)被發(fā)現(xiàn)的去甲基酶，可影響剪切因子SRSF2的RNA結(jié)合能力，進(jìn)而調(diào)控pre-mRNA的剪切加工過程[3]。目前已發(fā)現(xiàn)FTO調(diào)節(jié)異常與肥胖、大腦畸形和生長遲緩相關(guān)，揭示m6A可能對(duì)這些疾病具有重要的調(diào)節(jié)功能[4-6]。ALKBH5是ALKB家族中被發(fā)現(xiàn)具有去甲基作用的另一個(gè)成員，以RNaseA敏感的方式與核小斑共定位，它可直接催化m6A-甲基化腺苷去除甲基而不同于FTO的氧化去甲基化[7].此外，ALKBH5和它的去甲基化活性影響新生mRNA合的成和剪切效率[7]，且ALKBH5敲除雄性小鼠表現(xiàn)出精子發(fā)生異常，這可能是精子發(fā)生相關(guān)基因表達(dá)改變的結(jié)果[7]。m6AmRNA修飾執(zhí)行其功能主要通過兩個(gè)途徑：精細(xì)調(diào)控甲基化轉(zhuǎn)錄本的結(jié)構(gòu)，以阻止或誘使蛋白-RNA相互作用；或被直接由m6A結(jié)合蛋白識(shí)別，誘發(fā)續(xù)反應(yīng)。目前一類含有YTH功能結(jié)構(gòu)域的蛋白被鑒定為m6A修飾的結(jié)合蛋白。其中YTHDF1,YTHDF2,YTHDF3，YTHDC1和YTHDC2己被證實(shí)是ｍ６Ａ的結(jié)合蛋白.YTHDF1主要影響ｍ６Ａ修飾基因的翻譯，YTHDF2主要影響ｍ６Ａ修飾基因的降解，而YTHDC1結(jié)合ｍ６Ａ修飾的基因影響其剪接。HNRNPC是一種豐富的核RNA結(jié)合蛋白，參與pre-mRNA的加工[8]。維持細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境的穩(wěn)定。細(xì)胞質(zhì)是細(xì)胞內(nèi)的液體，其中包含了各種細(xì)胞器和細(xì)胞骨架等結(jié)構(gòu)。

應(yīng)退回純酒精中重新脫水，然后再透明，否則切片難以鏡檢。（4）二甲苯應(yīng)盡量保持無水，應(yīng)經(jīng)常更換，或用紗布包無水硫酸銅放入染色缸內(nèi)吸收水分。5.透蠟注意事項(xiàng)（1）透蠟的目的是除去組織中的透明劑（如二甲苯等），使石蠟滲透到組織內(nèi)部達(dá)到飽和程度以便包埋。透蠟時(shí)間根據(jù)組織大小而定。（2）盡量保持在較低溫度中進(jìn)行，以石蠟不凝固為度。（3）透蠟溫度要恒定，不可忽高忽低。（4）操作要迅速，力求在短的時(shí)間內(nèi)完成石蠟透入過程，以免引起組織變硬、變脆、收縮等。（5）注意溫度不要過高，以免組織發(fā)脆。6.染色水洗注意事項(xiàng)（1）染色原理：伊紅主要染細(xì)胞質(zhì)，著色濃淡應(yīng)與蘇木精染細(xì)胞核的濃淡相配合，如果細(xì)胞核染色較濃，細(xì)胞質(zhì)也應(yīng)濃染，以獲得鮮明的對(duì)比。（2）染色時(shí)間應(yīng)根據(jù)染色劑的成熟程度及室溫高低，適當(dāng)縮短或延長。室溫高時(shí)促進(jìn)染色，染色時(shí)間可短些，否則可適當(dāng)延長時(shí)間，冬季室溫低時(shí)可放入恒溫箱中染色。（3）注意流水不能過大，以防切片脫落。（4）如果細(xì)胞核染色較淺，細(xì)胞質(zhì)也應(yīng)淡染?？稍谝良t乙醇液中滴加數(shù)滴冰醋酸助染，促使細(xì)胞質(zhì)容易著色，并且經(jīng)乙醇脫水時(shí)不易褪色。進(jìn)行免疫沉淀法時(shí)，抗體需要和一個(gè)受質(zhì)結(jié)合。海南小鼠科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)

常用于研究細(xì)胞的成瘤能力、細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、細(xì)胞的耐藥和靶分子對(duì)腫瘤細(xì)胞的發(fā)展的影響等等。云南科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)室

如胰腺，一般取胰島較多的胰腺尾部；肺應(yīng)取有細(xì)支氣管及帶有軟骨片的小支氣管部。如果實(shí)驗(yàn)需進(jìn)行多樣本的采集，采集順序應(yīng)按照：消化，神經(jīng)系統(tǒng)，皮膚，肌肉等的順序進(jìn)行。選好塊的切面。熟悉某些成分安排，然后決定其切面的走向；如一長管狀以橫切面較好。切除不需要的部分。特別是周圍的脂肪等，應(yīng)盡可能掉，否則給固定、脫水、浸蠟、切片等帶來一些不必要的問題。樣品的固定（1）固定的方法：①小塊固定法：從動(dòng)物取下的小塊，立即置入液態(tài)固定劑（這是應(yīng)用經(jīng)常的方法）。②注射/灌注固定法：某些塊由于體積過大或固定液極難滲入內(nèi)部或需要對(duì)整個(gè)臟器或整個(gè)動(dòng)物進(jìn)行固定，這時(shí)宜采用注射固定法，將固定液注入血管，經(jīng)血管分支到達(dá)整個(gè)和全身，從而得到充分的固定。另，空腔比如肺，肺內(nèi)含有空氣，固定液難以滲入，建議先做肺灌注，使得肺充盈滿固定液以后再進(jìn)行保存，如果空腔中氣體沒有排出，后續(xù)可能影響固定效果（沒有灌注的肺會(huì)浮在液體表面不利于固定，切片以后也會(huì)看到很多的空泡）。③蒸汽固定法：比較細(xì)小而薄的標(biāo)本，可用鋨酸或甲醛蒸汽固定。主要用于血液或細(xì)胞涂片以及某些薄膜的固定。。云南科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)室