易操作原代細(xì)胞和細(xì)胞系的比較3.原代細(xì)胞的應(yīng)用由于原代細(xì)胞生物學(xué)特性未發(fā)生很大改變，接近和反映體內(nèi)生長(zhǎng)特性，因此是：(1)研究生物體細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝、繁殖提供有力的工具；(2)更好實(shí)現(xiàn)醫(yī)診治模式，實(shí)現(xiàn)個(gè)體化用藥的目的。第二部分：原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)技術(shù)原代培養(yǎng)的原理將動(dòng)物機(jī)體的各種組織從機(jī)體中取出，經(jīng)各種酶(常用胰蛋白酶/膠原酶)、螯合劑(常用EDTA)或機(jī)械方法處理，分散成單細(xì)胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖，這一過(guò)程稱原代培養(yǎng)。主要包括取材——分離——培養(yǎng)等3部分；在原代細(xì)胞應(yīng)用較多的包括：組織（如實(shí)體瘤、皮膚等）、懸浮細(xì)胞的取材等。下面依次介紹：一、組織的取材病人自體的原代細(xì)胞由于更接近臨床患者標(biāo)本，可以更好實(shí)現(xiàn)醫(yī)療的診治模式，實(shí)現(xiàn)個(gè)體化用藥的目的。所以對(duì)病人自體細(xì)胞體外分離與培養(yǎng)十分必要?；具^(guò)程如下圖所示：原代細(xì)胞的分離步驟備注：上圖細(xì)胞為肉瘤患者的原代細(xì)胞具體步驟如下：1.在無(wú)菌條件下的冰上對(duì)新鮮離體的組織，剔除包膜及壞死組織，無(wú)菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；2.加入2mmol的EDTA，搖勻后放置冰上約30-60min；3.離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；4.消化期間，置于37°培養(yǎng)箱。本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)光鏡檢測(cè)形態(tài)，經(jīng)陽(yáng)性蛋白標(biāo)記物免疫熒光檢測(cè)鑒定及糖原染色檢測(cè)鑒定陽(yáng)性。吉林原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞檢測(cè)平臺(tái)可提供細(xì)胞增殖/細(xì)胞毒性、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、細(xì)胞遷移/細(xì)胞侵襲等細(xì)胞學(xué)檢測(cè)技術(shù)服務(wù)。通過(guò)細(xì)胞學(xué)檢測(cè)可以對(duì)目的基因的生理功能及其相互作用進(jìn)行研究,是基礎(chǔ)科研及藥物研發(fā)中檢測(cè)物質(zhì)毒性、評(píng)估藥物安全性及有效性、的發(fā)生及增值等的重用手段。分子檢測(cè)平臺(tái)可提供反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR、定點(diǎn)突變、載體構(gòu)建、種屬鑒定、質(zhì)粒提取等常規(guī)分子生物學(xué)技術(shù)服務(wù)，此外憑借分子平臺(tái)專業(yè)團(tuán)隊(duì)多年經(jīng)驗(yàn)積累，可開(kāi)展基因編輯技術(shù)(CRSPRCas9)、miRNA靶基因的預(yù)測(cè)與驗(yàn)證、雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)等特色技術(shù)服務(wù)。分子檢測(cè)應(yīng)用于科學(xué)研究及醫(yī)療診斷領(lǐng)域，為疾病的研究和診斷提供更準(zhǔn)確、更科學(xué)的信息和依據(jù)。為生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域，提供了一個(gè)強(qiáng)有力的技術(shù)平臺(tái)。蛋白檢測(cè)平臺(tái)可提供WB、IHC、IF、IP/CO-IP、ELISA等免疫學(xué)檢測(cè)服務(wù)。免疫學(xué)檢測(cè)是根據(jù)抗原、抗體反應(yīng)的原理，利用已知的抗原檢測(cè)未知的抗體或利用已知的抗體檢測(cè)未知的抗原，可以定性、定位和定量地檢測(cè)某一特異蛋白。這些方法為科研人員在研究諸如細(xì)胞信號(hào)通路、生理過(guò)程調(diào)控、代謝調(diào)節(jié)等方面提供重要手段。病毒平臺(tái)可提供慢病毒包裝、腺病毒包裝、穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株篩選的技術(shù)服務(wù)。黑龍江乳鼠原代細(xì)胞服務(wù)本公司生產(chǎn)的SD大鼠心肌成纖維細(xì)胞采用混合酶消化、密度梯度離心制備而來(lái)。

細(xì)胞之間的促生長(zhǎng)作用很小，也很難使細(xì)胞適應(yīng)從體內(nèi)的組織環(huán)境到被分散后進(jìn)入生存環(huán)境的變化過(guò)程。如果接種的細(xì)胞密度過(guò)大，會(huì)導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足，代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代。2）適當(dāng)增大原代培養(yǎng)接種的細(xì)胞密度，給培養(yǎng)的細(xì)胞提供更多的類(lèi)似于在體內(nèi)時(shí)細(xì)胞之間的相互作用，會(huì)極大提高原代培養(yǎng)的細(xì)胞在體外存活率。待細(xì)胞適應(yīng)體外環(huán)境后進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)再以較低的密度接種和培養(yǎng)。3）盡快使接種的細(xì)胞貼壁，是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵?？梢栽诮臃N后先將培養(yǎng)瓶置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3h到5h，待細(xì)胞貼壁后，再補(bǔ)足培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。3、懸浮型原代細(xì)胞1）必須保持細(xì)胞的懸浮狀態(tài)。可以通過(guò)增加培養(yǎng)液的黏度來(lái)幫助細(xì)胞呈懸浮狀態(tài)，如給培養(yǎng)液中加入低濃度的透明質(zhì)酸復(fù)合物。在有攪拌裝置的培養(yǎng)器皿內(nèi)加入培養(yǎng)液是，以5ml為限度，否則攪拌時(shí)會(huì)產(chǎn)生氣泡對(duì)細(xì)胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過(guò)快，否則即可使培養(yǎng)液溢出又容易造成污染。如果培養(yǎng)液的量在5ml以下，可以采用旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。給懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞換液時(shí)要注意不要吸出細(xì)胞。2）能夠進(jìn)行懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞，其生命力一般都比較旺盛，體外分裂增殖的速度較快，營(yíng)養(yǎng)成分消耗大，換液時(shí)間隔一般較短。

且方便標(biāo)號(hào)對(duì)比。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，根據(jù)本實(shí)用新型的一個(gè)方面，本實(shí)用新型提供了如下技術(shù)方案：一種可以分離的細(xì)胞培養(yǎng)板，其包括底座、一號(hào)培養(yǎng)板、二號(hào)培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿槽和橫向標(biāo)尺，所述底座頂部固定安裝有一號(hào)培養(yǎng)板，所述一號(hào)培養(yǎng)板頂部設(shè)置有梯形卡槽，所述一號(hào)培養(yǎng)板頂部設(shè)置有二號(hào)培養(yǎng)板，所述二號(hào)培養(yǎng)板底部固定安裝有與梯形卡槽相配合的梯形卡塊。作為本實(shí)用新型所述的一種可以分離的細(xì)胞培養(yǎng)板的一種方案，其中：所述一號(hào)培養(yǎng)板和所述二號(hào)培養(yǎng)板表面設(shè)置有培養(yǎng)皿槽，所述培養(yǎng)皿槽內(nèi)腔側(cè)壁設(shè)置有限位槽，所述限位槽內(nèi)腔固定安裝有限位彈簧，所述限位彈簧頂部貫穿限位槽設(shè)置有固定桿。作為本實(shí)用新型所述的一種可以分離的細(xì)胞培養(yǎng)板的一種方案，其中：所述一號(hào)培養(yǎng)板和二號(hào)培養(yǎng)板的前表面左側(cè)設(shè)置有縱向標(biāo)尺，所述一號(hào)培養(yǎng)板和二號(hào)培養(yǎng)板的前表面左側(cè)設(shè)置有橫向標(biāo)尺，所述一號(hào)培養(yǎng)板和所述二號(hào)培養(yǎng)板的頂部設(shè)置有防護(hù)蓋。作為本實(shí)用新型所述的一種可以分離的細(xì)胞培養(yǎng)板的一種方案，其中：所述梯形卡槽的前表面固定安裝有固定螺絲，所述梯形卡塊上設(shè)置有相配合的螺孔，所述梯形卡槽內(nèi)腔底部設(shè)置有滑槽，梯形卡塊底部設(shè)置有與滑槽相配合的滑塊。名稱：人臍靜脈血管平滑肌細(xì)胞 Human umbilical vein vascular smooth muscle cell 貨號(hào)：PC-H-18103。

如果接種的細(xì)胞密度過(guò)低，細(xì)胞之間的促生長(zhǎng)作用很小，也很難使細(xì)胞適應(yīng)從體內(nèi)的組織環(huán)境到被分散后進(jìn)入生存環(huán)境的變化過(guò)程。如果接種的細(xì)胞密度過(guò)大，會(huì)導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足，代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代。2）適當(dāng)增大原代培養(yǎng)接種的細(xì)胞密度，給培養(yǎng)的細(xì)胞提供更多的類(lèi)似于在體內(nèi)時(shí)細(xì)胞之間的相互作用，會(huì)極大提高原代培養(yǎng)的細(xì)胞在體外存活率。待細(xì)胞適應(yīng)體外環(huán)境后進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)再以較低的密度接種和培養(yǎng)。3）盡快使接種的細(xì)胞貼壁，是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵。可以在接種后先將培養(yǎng)瓶置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3h到5h，待細(xì)胞貼壁后，再補(bǔ)足培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。3、懸浮型原代細(xì)胞1）必須保持細(xì)胞的懸浮狀態(tài)?？梢酝ㄟ^(guò)增加培養(yǎng)液的黏度來(lái)幫助細(xì)胞呈懸浮狀態(tài)，如給培養(yǎng)液中加入低濃度的透明質(zhì)酸復(fù)合物。在有攪拌裝置的培養(yǎng)器皿內(nèi)加入培養(yǎng)液是，以5ml為限度，否則攪拌時(shí)會(huì)產(chǎn)生氣泡對(duì)細(xì)胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過(guò)快，否則即可使培養(yǎng)液溢出又容易造成污染。如果培養(yǎng)液的量在5ml以下，可以采用旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。給懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞換液時(shí)要注意不要吸出細(xì)胞。2）能夠進(jìn)行懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞，其生命力一般都比較旺盛，體外分裂增殖的速度較快，營(yíng)養(yǎng)成分消耗大。在進(jìn)行血管內(nèi)皮細(xì)胞實(shí)驗(yàn)時(shí)，通常選用的細(xì)胞模型為人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞。黑龍江原代細(xì)胞服務(wù)

采用波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色鑒定，結(jié)果顯示波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色鑒定呈現(xiàn)陽(yáng)性。吉林原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

每15min搖晃一次，消化時(shí)間根據(jù)組織來(lái)定，約1-2h；5.待大部分組織塊消化成透明狀時(shí)，用40μm的細(xì)胞濾網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞，收集；6.用培養(yǎng)基重懸，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。常見(jiàn)問(wèn)題解答：Q：為什么我取得原代織，分離的卻不是細(xì)胞？A：取材時(shí)，我們要熟悉所需組織的類(lèi)型和部位特征，選擇細(xì)胞集中、活力較好的部分。避免結(jié)締等正常組織。Q：若是細(xì)胞中混成纖維細(xì)胞，如何去除？A：成纖維細(xì)胞的去除對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)十分重要。由于成纖維細(xì)胞貼壁速度細(xì)胞快，可利用反復(fù)貼壁法使二者分離，進(jìn)而達(dá)到成纖維細(xì)胞的目的。Q：為什么離心后，沒(méi)有細(xì)胞分離出來(lái)？A：需要考慮消化酶的因素，由于組織較致密，胰酶無(wú)法消化，一般選用膠原酶，如膠原酶Ⅳ。若是組織十分致密可以再結(jié)合機(jī)械法，如研磨或者攪拌加速細(xì)胞分散。如下表為二者的區(qū)別：膠原酶胰酶來(lái)源細(xì)菌胰臟消化組織纖維多的硬組織軟組織對(duì)細(xì)胞影響傷害小長(zhǎng)時(shí)間有損傷作用力度緩和強(qiáng)注：膠原酶分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細(xì)胞膠原酶，根據(jù)分離的組織類(lèi)型需選擇合適的膠原酶類(lèi)型。Q：消化時(shí)間如何確定？A：具體的消化酶的量和消化時(shí)間可根據(jù)組織類(lèi)型和多少進(jìn)行調(diào)整。Q：消化之前為什么用EDTA?A：EDTA是一種非酶消化物，又稱螯合劑，對(duì)一些組織。吉林原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)