收藏查看我的收藏0有用+1已投票0細(xì)胞培養(yǎng)編輯鎖定本詞條由“科普中國(guó)”科學(xué)百科詞條編寫與應(yīng)用工作項(xiàng)目審核。細(xì)胞培養(yǎng)（cellculture）是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無(wú)菌、適宜溫度、酸堿度和一定營(yíng)養(yǎng)條件等），使之生存、生長(zhǎng)、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對(duì)于整個(gè)生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來(lái)說，細(xì)胞培養(yǎng)都是一個(gè)必不可少的過程，細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的大規(guī)模克隆。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個(gè)細(xì)胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡(jiǎn)單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞，這是克隆技術(shù)必不可少的環(huán)節(jié)，而且細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的克隆。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是細(xì)胞生物學(xué)研究方法中重要和常用技術(shù)，通過細(xì)胞培養(yǎng)既可以獲得大量細(xì)胞，又可以借此研究細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞的合成代謝、細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖等。[1]中文名細(xì)胞培養(yǎng)外文名cellculture別名細(xì)胞克隆術(shù)語(yǔ)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)地位生物技術(shù)中基礎(chǔ)的技術(shù)常用培養(yǎng)基無(wú)鈣、鎂、離子溶液目錄1分類2環(huán)境及條件?環(huán)境因素?營(yíng)養(yǎng)條件3設(shè)施器材4一般過程5具體步驟6注意事項(xiàng)細(xì)胞培養(yǎng)分類編輯動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)高速冷凍離心機(jī)在所有的細(xì)胞離體培養(yǎng)中，困難的是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化一方面是干細(xì)胞鑒定的主要方法。內(nèi)蒙古大鼠原代細(xì)胞技術(shù)

細(xì)胞檢測(cè)平臺(tái)可提供細(xì)胞增殖/細(xì)胞毒性、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、細(xì)胞遷移/細(xì)胞侵襲等細(xì)胞學(xué)檢測(cè)技術(shù)服務(wù)。通過細(xì)胞學(xué)檢測(cè)可以對(duì)目的基因的生理功能及其相互作用進(jìn)行研究,是基礎(chǔ)科研及藥物研發(fā)中檢測(cè)物質(zhì)毒性、評(píng)估藥物安全性及有效性、的發(fā)生及增值等的重用手段。分子檢測(cè)平臺(tái)可提供反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR、定點(diǎn)突變、載體構(gòu)建、種屬鑒定、質(zhì)粒提取等常規(guī)分子生物學(xué)技術(shù)服務(wù)，此外憑借分子平臺(tái)專業(yè)團(tuán)隊(duì)多年經(jīng)驗(yàn)積累，可開展基因編輯技術(shù)(CRSPRCas9)、miRNA靶基因的預(yù)測(cè)與驗(yàn)證、雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)等特色技術(shù)服務(wù)。分子檢測(cè)應(yīng)用于科學(xué)研究及醫(yī)療診斷領(lǐng)域，為疾病的研究和診斷提供更準(zhǔn)確、更科學(xué)的信息和依據(jù)。為生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域，提供了一個(gè)強(qiáng)有力的技術(shù)平臺(tái)。蛋白檢測(cè)平臺(tái)可提供WB、IHC、IF、IP/CO-IP、ELISA等免疫學(xué)檢測(cè)服務(wù)。免疫學(xué)檢測(cè)是根據(jù)抗原、抗體反應(yīng)的原理，利用已知的抗原檢測(cè)未知的抗體或利用已知的抗體檢測(cè)未知的抗原，可以定性、定位和定量地檢測(cè)某一特異蛋白。這些方法為科研人員在研究諸如細(xì)胞信號(hào)通路、生理過程調(diào)控、代謝調(diào)節(jié)等方面提供重要手段。病毒平臺(tái)可提供慢病毒包裝、腺病毒包裝、穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株篩選的技術(shù)服務(wù)。黑龍江大鼠原代細(xì)胞利用流式細(xì)胞儀對(duì)分選的原代HUVECs進(jìn)行鑒定。

凍存過程中保護(hù)劑的選用、細(xì)胞密度、降溫速度及復(fù)蘇時(shí)溫度、融化速度等都對(duì)細(xì)胞活力有影響。[4]細(xì)胞培養(yǎng)具體步驟編輯一、細(xì)胞復(fù)蘇將凍存細(xì)胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動(dòng)促進(jìn)其融化。移入15ml離心管中，加入10ml預(yù)熱的DMEM完全培養(yǎng)基，輕輕吹勻，離心，2000rpmX2min，棄上清液。加入10mlDMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入10mlDMEM完全培養(yǎng)基，輕輕吹打，接種于10cm盤中，在含5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。二、細(xì)胞傳代細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時(shí)．去培養(yǎng)基，10mlPBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱3min。加人1mlDMEM完全培養(yǎng)基終止胰酶消化，轉(zhuǎn)移至15ml離心管。加入10mlPBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)盤，轉(zhuǎn)移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。再加入10mlPBS（經(jīng)高壓滅菌，保存于40C），吹勻，吸取10微升進(jìn)行計(jì)數(shù)，按照1×105/盤接種，在含5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。三、細(xì)胞凍存細(xì)胞密度達(dá)到80%～90%時(shí)，去培養(yǎng)基，10mlPBS清洗2次。加入3ml含，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱3min。加入lmlDMEM完全培養(yǎng)基終止胰酶消化，轉(zhuǎn)移至15ml離心管。加入10mlPBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)盤，轉(zhuǎn)移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。加入1ml凍存液（90%血清，10%DMSO），放入凍存盒內(nèi)。

易操作原代細(xì)胞和細(xì)胞系的比較3.原代細(xì)胞的應(yīng)用由于原代細(xì)胞生物學(xué)特性未發(fā)生很大改變，接近和反映體內(nèi)生長(zhǎng)特性，因此是：(1)研究生物體細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝、繁殖提供有力的工具；(2)更好實(shí)現(xiàn)醫(yī)療的診治模式，實(shí)現(xiàn)個(gè)體化用藥的目的。第二部分：原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)技術(shù)原代培養(yǎng)的原理將動(dòng)物機(jī)體的各種組織從機(jī)體中取出，經(jīng)各種酶(常用胰蛋白酶/膠原酶)、螯合劑(常用EDTA)或機(jī)械方法處理，分散成單細(xì)胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖，這一過程稱原代培養(yǎng)。主要包括取材——分離——培養(yǎng)等3部分；在原代細(xì)胞應(yīng)用較多的包括：組織（如實(shí)體瘤、皮膚等）、懸浮細(xì)胞的取材等。下面依次介紹：一、組織的取材病人自體的原代細(xì)胞由于更接近臨床患者標(biāo)本，可以更好實(shí)現(xiàn)醫(yī)療的診治模式，實(shí)現(xiàn)個(gè)體化用藥的目的。所以對(duì)病人自體細(xì)胞體外分離與培養(yǎng)十分必要。基本過程如下圖所示：原代細(xì)胞的分離步驟備注：上圖細(xì)胞為肉瘤患者的原代細(xì)胞具體步驟如下：1.在無(wú)菌條件下的冰上對(duì)新鮮離體的組織，剔除包膜及壞死組織，無(wú)菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；2.加入2mmol的EDTA，搖勻后放置冰上約30-60min；3.離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；4.消化期間。人臍靜脈血管平滑肌細(xì)胞分離自臍帶組織，是臍靜脈的重要結(jié)構(gòu)之一。

又稱螯合劑，對(duì)一些組織，尤其是上皮組織分散效果好。與細(xì)胞上的鈣、鎂離子結(jié)合形成螯合物后，形成的機(jī)械力可使細(xì)胞分散。Q：細(xì)胞量太少，長(zhǎng)不起來(lái)怎么辦？A：有幾種辦法，如對(duì)沒消化完的組織塊反復(fù)消化，盡量多收集一些細(xì)胞；并且盡量傳代到小皿里，如6孔板都可以。若是細(xì)胞仍太少，應(yīng)耐心等待，盡量不要傳代，只換液。Q：細(xì)胞難以貼壁？A：盡快使接種的細(xì)胞貼壁，是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵。為了盡快促進(jìn)細(xì)胞貼壁，可以提前1h將千分之的明膠鋪于培養(yǎng)板。Q：原代細(xì)胞培養(yǎng)方法與細(xì)胞系不同之處在哪里？A：培養(yǎng)基一般選用RPM1640，DMEM等，建議能加入促生長(zhǎng)的物質(zhì)：如胰島素、氫化可的松、EGF等因子。二、原代正常組織分離皮膚是人體長(zhǎng)久以來(lái)，表皮細(xì)胞一種被認(rèn)為是難以培養(yǎng)的細(xì)胞，限制了皮膚生物學(xué)基礎(chǔ)研究的發(fā)展。作為表皮的主要細(xì)胞，角質(zhì)形成細(xì)胞已經(jīng)成為我們了解皮膚生物學(xué)至關(guān)重要的許多原創(chuàng)性研究的焦點(diǎn)。下面就介紹下小鼠角質(zhì)形成細(xì)胞的分離和培養(yǎng)。基本過程如下圖：原代小鼠角質(zhì)細(xì)胞的分離步驟實(shí)驗(yàn)結(jié)果：分離出的小鼠角質(zhì)細(xì)胞常見問題解答：Q：皮膚組織作為正常組織，組織分離主要區(qū)別在哪里？A：首先，皮膚組織需要用中性分離酶dispaseII將表皮分離出來(lái)；其次。人臍間充質(zhì)干細(xì)胞，Human Umbilical cord mesenchymal stem Cells 貨號(hào)：PC-H-18105。黑龍江哪里有原代細(xì)胞購(gòu)買

細(xì)胞操作都需嚴(yán)格按照無(wú)菌操作進(jìn)行。內(nèi)蒙古大鼠原代細(xì)胞技術(shù)

導(dǎo)致集中消毒設(shè)計(jì)的紫外燈無(wú)法有效照射內(nèi)部空間，容易滋生細(xì)菌，影響細(xì)胞培養(yǎng)的存活率。因此，現(xiàn)有技術(shù)存在缺陷，需要改進(jìn)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本實(shí)用新型所要解決的技術(shù)問題是：提供一種可存放大量細(xì)胞培養(yǎng)皿、空間利用率高、存放方便，具有殺菌消毒作用的新型原代細(xì)胞培養(yǎng)箱。本實(shí)用新型的技術(shù)方案如下：一種新型原代細(xì)胞培養(yǎng)箱，包括若干個(gè)用于存放細(xì)胞培養(yǎng)皿的內(nèi)箱盒、及用于存放所述內(nèi)箱盒的外箱體，所述外箱體內(nèi)設(shè)有若干列中空的矩形槽，各所述矩形槽的兩側(cè)分別設(shè)有若干層對(duì)稱的滑槽，若干層所述滑槽由上至下等間距依次設(shè)置，每一層所述滑槽的正面及背面各存設(shè)有一內(nèi)箱盒，所述內(nèi)箱盒包括底盒、紫外燈及上蓋，所述紫外燈設(shè)于底盒內(nèi)，所述底盒與上蓋的一側(cè)通過合頁(yè)鉸接，所述底盒與上蓋的另一側(cè)通過鎖扣扣合連接，所述底盒上設(shè)有推拉把手，所述底盒的兩側(cè)分別設(shè)有與滑槽適配的滑輪，所述底盒兩側(cè)的頭部分別設(shè)有與滑槽適配的滑塊。采用上述技術(shù)方案，所述的新型原代細(xì)胞培養(yǎng)箱中，所述滑槽的高度大于滑塊的高度，所述滑塊的高度大于滑輪的直徑。采用上述各個(gè)技術(shù)方案，所述的新型原代細(xì)胞培養(yǎng)箱中，所述鎖扣包括鎖環(huán)及鎖塊，所述鎖環(huán)與上蓋活動(dòng)連接，所述鎖塊設(shè)于底盒外部。內(nèi)蒙古大鼠原代細(xì)胞技術(shù)