CCK8的優(yōu)點:方法方便,不用洗滌細胞,不需要放射性同位素和有機溶劑;CCK-8快速檢測;CCK-8檢測靈敏度高,細胞密度低也可以檢測;CCK-8的重復性優(yōu)于MTT法;CCK-8對細胞的毒性很??;CCK-8細胞活性檢測試劑中是1瓶溶液,不需要現(xiàn)用現(xiàn)配,即開即用。CCK8的缺點:相比于與MTT法,CCK8的價格比較昂貴生成的甲瓚物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。用途:***篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、**藥敏試驗。向每孔加入10 μL CCK溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數(shù))。北京cck8 數(shù)據(jù)要求
特點不同1、CellCountingKit-8:靈敏度高,數(shù)據(jù)可靠,重現(xiàn)性好;操作簡便,省時省力;水溶性,不需要換液,尤其適合于懸浮細胞;無需放射性同位素和有機溶劑,對細胞毒性低;適合于高通量***篩選。2、MTT法:特點是靈敏度高、經(jīng)濟。三、應用不同1、CellCountingKit-8:主要用途為***篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、**藥敏試驗。2、MTT法:***用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗*****篩選、細胞毒性試驗以及**放射敏感性測定等。天津cck8保存CCK8雖好,這些情況下不建議用!
統(tǒng)一鋪好后,待細胞完全沉淀下來后,在顯微鏡下觀察各實驗組的細胞密度,如果密度不均勻,則固定一組,微調(diào)其他組細胞的量再次鋪板(如:發(fā)現(xiàn)NC組細胞較多,降低細胞量再次鋪板),放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。4.從鋪板后第二天開始,每孔加入10-20μlCCK-8溶液,如果每孔的培養(yǎng)基為100μl,則加入10μlCCK-8溶液,如果每孔的培養(yǎng)基為200μl,則加入20μlCCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數(shù))。用加了相應量細胞培養(yǎng)液和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。
貼壁生長的時間我一般就直接讓它貼壁長24h了,這個時間細胞已經(jīng)貼壁完全,而且這樣設(shè)置時間對自己安排實驗時間也方便。沒人愿意大半夜爬起來做實驗吧。3、加藥后的孵育時間,我的實驗摸了3個時間,24h,48h,72h。然后根據(jù)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性(RSD)、OD值的范圍(1.0左右)這些來選擇比較好的時間。太長了就沒有必要了,細胞呆在孔里幾天不換液結(jié)果可想而知了。4、CCK8試劑加入量,說明書中明確寫出建議加入量為培養(yǎng)基體積的10%。這里有一個問題:假設(shè)我要孔內(nèi)是200微升的體系,即細胞懸液+藥液+CCK8=200微升呢,還是細胞懸液+藥液=200微升,cck8不算在體系內(nèi)呢。關(guān)于這一點文獻報道不一致。本人**終采用的是后者。5、cck8試劑加入后孵育時間,隨著時間的增加,OD值就會增大??傊瓌t就是把OD值控制在1.0左右。這里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。加入CCK8那會空白對照組的細胞剛好長滿嗎?
五、實驗注意事項:·若暫時不測定OD值,可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定,吸光度不會發(fā)生變化。·如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話,可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基(除去培養(yǎng)基,并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加入新的培養(yǎng)基),去掉***影響。當然***影響比較小的情況下,可以不更換培養(yǎng)基,直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可。·當使用標準96孔板時,貼壁細胞的**小接種量至少為1,000個/孔(100μl培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低,因此推薦接種量不低于2,500個/孔(100μl培養(yǎng)基)。靈敏度高,數(shù)據(jù)可靠,重現(xiàn)性好.湖北cck8成分
生成的甲臜物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比.北京cck8 數(shù)據(jù)要求
細胞活性檢測1.在96孔板中接種細胞懸液(100ml/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預培養(yǎng)(在37℃,5%CO2的條件下)。2.向每孔加入10ml的CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響O.D值的讀數(shù))。3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。4.用酶標儀測定在450nm處的吸光度。5.如果暫時不測定O.D值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入10ml0.1MHCl溶液或者1%w/vSDS溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。細胞增殖-毒性檢測1.在96孔板中配制100ml的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預培養(yǎng)24小時(在37℃,5%CO2的條件下)。北京cck8 數(shù)據(jù)要求
上海儒安生物科技有限公司位于真南路4268號2幢J1718室,擁有一支專業(yè)的技術(shù)團隊。專業(yè)的團隊大多數(shù)員工都有多年工作經(jīng)驗,熟悉行業(yè)專業(yè)知識技能,致力于發(fā)展上海儒安生物的品牌。公司以用心服務為重點價值,希望通過我們的專業(yè)水平和不懈努力,將從事生物技術(shù)、物聯(lián)網(wǎng)技術(shù)、網(wǎng)絡(luò)技術(shù)領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)轉(zhuǎn)讓、技術(shù)服務,軟件開發(fā),電子商務(不得從事增值電信、金融業(yè)務),化工產(chǎn)品及原料(除危險化學品、監(jiān)控化學品、民用爆炸物品、易制毒化學品)、實驗窒設(shè)備的銷售。等業(yè)務進行到底。自公司成立以來,一直秉承“以質(zhì)量求生存,以信譽求發(fā)展”的經(jīng)營理念,始終堅持以客戶的需求和滿意為重點,為客戶提供良好的細胞轉(zhuǎn)染試劑,ecl發(fā)光液,cck8細胞增殖,內(nèi)參抗體,從而使公司不斷發(fā)展壯大。