微滴),包含一個或多個拷貝的核酸分子(也就是說我們所說的DNA模板),這是與PCR或qPCR反應(yīng)的區(qū)別,PCR或qPCR只在一個反應(yīng)體系中進(jìn)行,而數(shù)字PCR在每個反應(yīng)單元(微滴)中都會對目標(biāo)分子進(jìn)行擴(kuò)增,擴(kuò)增結(jié)束后統(tǒng)計熒光信號并分析。數(shù)字PCR檢測其實離我們越來越近,下面我們以幾個臨床案例研究來舉例,展示數(shù)字PCR巨大的臨床應(yīng)用前景。1).個體化診療通過檢測T790M位點突變情況,可以更好地評估一代TKI藥物的療效及耐藥情況并指導(dǎo)第三代TKI靶向藥Osimertinib的使用。然而,由于qPCR平臺ARMS檢測技術(shù)的靈敏度有限,沒有辦法在含大量EGFR基因野生型背景核酸中高效準(zhǔn)確的檢測到T790M突變。這個時候dPCR技術(shù)展現(xiàn)出了****的檢測精度,此外,dPCR定量的優(yōu)勢也能充分發(fā)揮出來了,可以監(jiān)控突變含量變化,做到及早發(fā)現(xiàn)耐藥。2.)基因表達(dá)分析伊馬替尼(Imatinib)可以有效幫助很多慢性髓細(xì)胞白血?。–ML)患者延長生存期,但是臨床上發(fā)現(xiàn),伊馬替尼的療效與BCR-ABL1融合基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物表達(dá)量有很大的關(guān)系。研究人員采用dPCR對CML患者的BCR-ABL1融合基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行測定,結(jié)果檢測下限可以達(dá)到,顯示出dPCR在痕量核酸檢測方面比qPCR具有無可比擬的優(yōu)勢[2]。 PCR儀是分子生物學(xué)相關(guān)實驗的常規(guī)儀器。上海力康實驗室PCR儀批發(fā)廠家
談?wù)剶?shù)字PCR那些事數(shù)字PCR即DigitalPCR(dPCR),它是一種核酸分子定量技術(shù)。相較于qPCR,數(shù)字PCR可讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個數(shù),是對起始樣品的定量。1、PCR之?dāng)?shù)字PCR技術(shù)發(fā)展歷程在定量PCR時,我們常常糾結(jié)一個問題,究竟是相對定量還是定量呢?如今,你無需糾結(jié)了,因為數(shù)字PCR(digitalPCR)來了。盡管這兩種技術(shù)有些類似,都是估計起始樣品中的核酸量,但它們有一個重要的區(qū)別。定量PCR是依靠標(biāo)準(zhǔn)曲線或參照基因來測定核酸量,而數(shù)字PCR則讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個數(shù),是對起始樣品的定量。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應(yīng)用領(lǐng)域:拷貝數(shù)變異、突變檢測、基因相對表達(dá)研究(如等位基因不平衡表達(dá))、二代測序結(jié)果驗證、miRNA表達(dá)分析、單細(xì)胞基因表達(dá)分析等。Nacia數(shù)字PCR2、數(shù)字PCR之dPCR檢測原理數(shù)字PCR即DigitalPCR(dPCR)是這幾年才迅速發(fā)展起來的一種核酸定量分析技術(shù),雖然出生的晚,但是潛力不小,因為數(shù)字PCR解決了qPCR這么多年懸而未決的問題,那就是不依賴于標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量并且可以將檢測靈敏度提高至單個核酸分子。那它是怎么做到的呢?這要從它的檢測原理說起。Nacia數(shù)字PCR數(shù)字PCR通過將一個樣本分成幾十到幾萬份,分配到不同的反應(yīng)單元。 上海力康實時熒光PCR儀生產(chǎn)廠家DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。
血友病是一組**為常見的遺傳性凝血障礙,根據(jù)因子缺陷的不同分為甲、乙兩型,(Ⅷ、Ⅸ因子缺陷),也有復(fù)合型血友病,但不常見。甲型血友病發(fā)病率為1/10000,Ⅷ因子基因位于G6PD基因附近,全長186Kb,大范圍的基因重排(缺失、插入、重復(fù))導(dǎo)致甲型血友病的病例很少,*為Ⅷ因子缺陷的5%,大部分病人表現(xiàn)為單個或少數(shù)堿基的突變。由于Ⅷ因子基因長度為186Kb,突變位點多,而且新生突變頻率高,從臨床角度講不能對每一個突變都檢測,可對**為常見的幾種突變類型進(jìn)行檢測,主要的檢測手段是PCR結(jié)合RELP分析。乙型血友病發(fā)病率占血友病的20%,其基因變化及檢測方法與甲型血友病類似。區(qū)別雄性及雌性的物質(zhì)基礎(chǔ)是性染色體,哺乳動物胚胎發(fā)育中,雌性表型不需要任何調(diào)節(jié),而雄性表型則由多因素決定,位于Y染色體上的指導(dǎo)雄性性別分ss化的基因命名為睪丸決定因子(TDF)?,F(xiàn)代研究表明,SRY(Sex-determiningregionofYchromosome)基因是TDF基因,位于Y染以體短臂末端。SRY區(qū)缺失易導(dǎo)致46XY核型個體發(fā)育成女性。進(jìn)行基因檢測可以檢出SRY基因組的易位及缺失,從而診斷性別發(fā)育異常,這一探索性別異常的研究非常熱門。另外還有一種46XY核型異常的病人即睪丸女性化,這是用于雄***受體。
移動箱式PCR實驗室嚴(yán)格按照生物安全實驗室的標(biāo)準(zhǔn)建造,配備有各類儀器設(shè)備,注重保障實驗人員安全,同時具備機(jī)動靈活、反應(yīng)迅速等特點,協(xié)助前線醫(yī)院開展檢測工作,為防控奉獻(xiàn)綿薄之力。由于集裝箱在出廠前已經(jīng)完成了單個箱體里面配置的所有安裝,水、電、風(fēng)、廢水和廢氣排放等系統(tǒng)已經(jīng)在箱體配備,同時保證了外面環(huán)境的安全。在現(xiàn)場基礎(chǔ)平整的條件下,只需要簡單的進(jìn)行箱體吊裝安放、給水和用電對接即可——在極端情況下甚至可以在無水無電的情況下短時運(yùn)行,真正做到組裝迅速。對接安裝本身不需要非常專業(yè)的人員,常規(guī)的疾控維修人員或工程人員就可以完成對接。箱體安放位置一般在室外,對于病人的隔離或控制病毒擴(kuò)散都是有利的。室外空氣流通快,不會像室內(nèi)空氣那樣高度聚集及停留產(chǎn)生氣溶膠導(dǎo)致病毒擴(kuò)散的風(fēng)險加大,箱式PCR實驗室有效的避免了聚集性和傳染性,當(dāng)箱式PCR實驗室內(nèi)部環(huán)境受到污染時,可以快速通過送排風(fēng)系統(tǒng)置換新鮮的空氣達(dá)到實驗室凈化的要求。箱式PCR實驗室可以重復(fù)使用,當(dāng)結(jié)束以后,經(jīng)過專業(yè)人員的消毒,可以重新運(yùn)到疾控中心、醫(yī)院、港口或者第三方檢測等單位再次使用,也可經(jīng)過專業(yè)存放和維護(hù),待需要時重新投入使用。PCR實驗室又叫“基因擴(kuò)增實驗室”,根據(jù)規(guī)定需有生物安全柜等防護(hù)設(shè)備及熒光定量PCR儀等檢測設(shè)備。
力康GM05智能梯度基因擴(kuò)增儀(控溫儀),基于WindowsCE智能化操作系統(tǒng),具備多達(dá)100余項故障自診斷功能。 連接互聯(lián)網(wǎng),用戶可通過IE瀏覽器登錄力康官網(wǎng)的下載中心進(jìn)行版本更新,完成PCR儀的遠(yuǎn)程維護(hù)、診斷和數(shù)據(jù)交換, 提高了工作效率。GM05智能梯度基因擴(kuò)增儀(控溫儀)支持觸摸和鼠標(biāo)操作,可外接移動U盤,打破傳統(tǒng)PCR儀的按鍵式操作模式,使得編寫程序及操作更加靈活方便。GM05智能梯度基因擴(kuò)增儀(控溫儀)率先在行業(yè)領(lǐng)域引入物聯(lián)網(wǎng)概念,具備新一代的信息技術(shù),以互聯(lián)網(wǎng)為基礎(chǔ),實現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)的延伸與拓展,以一臺上位機(jī)(PC)為主機(jī),可連接多達(dá)200臺下位機(jī)(GM05智能梯度基因擴(kuò)增儀/控溫儀)。只要樣本有一個病原體存在,PCR就可以檢測到。國產(chǎn)實驗室PCR儀價格信息
熒光定量PCR儀是以熒光染料或熒光標(biāo)記探針偵測每次聚合酶鏈鎖反應(yīng)(PCR)循環(huán)后產(chǎn)物總量。上海力康實驗室PCR儀批發(fā)廠家
基本的PCR須具備:1.要被復(fù)制的DNA模板2.界定復(fù)制范圍兩端的引物(四種脫氧核苷酸)及水。利用升溫使DNA變性,在聚合酶的作用下使單鏈復(fù)制成雙鏈,進(jìn)而達(dá)到基因復(fù)制的目的。PCR的設(shè)想核酸研究已有100多年的歷史,二十世紀(jì)60年代末、70年代初人們致力于研究基因的體外分離技術(shù),Korana于1971年提出核酸體外擴(kuò)增的設(shè)想:“經(jīng)過DNA變性,與合適的引物雜交,用DNA聚合酶延伸引物,并不斷重復(fù)該過程便可克隆tRNA基因”。1985年美國PE-Cetus公司人類遺傳研究室的Mullis等發(fā)明了具有劃時代意義的聚合酶鏈反應(yīng)。其原理類似于DNA的體內(nèi)復(fù)制。Mullis使用的DNA聚合酶是大腸桿菌DNA聚合酶I的Klenow片段,其缺點是:①Klenow酶不耐高溫,90℃會變性失活,每次循環(huán)都要重新加。②引物鏈延伸反應(yīng)在37℃下進(jìn)行,容易發(fā)生模板和引物之間的堿基錯配,其PCR產(chǎn)物特異性較差,合成的DN段不均一。此種以Klenow酶催化的PCR技術(shù)雖較傳統(tǒng)的基因擴(kuò)增具備許多突出的優(yōu)點,但由于Klenow酶不耐熱,在DNA模板進(jìn)行熱變性時,會導(dǎo)致此酶鈍化,每加入一次酶只能完成一個擴(kuò)增反應(yīng)周期,給PCR技術(shù)操作程序添了不少困難。這使得PCR技術(shù)在一段時間內(nèi)沒能引起生物醫(yī)學(xué)界的足夠重視。 上海力康實驗室PCR儀批發(fā)廠家
力新儀器(上海)有限公司專注技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品研發(fā),發(fā)展規(guī)模團(tuán)隊不斷壯大。公司目前擁有較多的高技術(shù)人才,以不斷增強(qiáng)企業(yè)重點競爭力,加快企業(yè)技術(shù)創(chuàng)新,實現(xiàn)穩(wěn)健生產(chǎn)經(jīng)營。力新儀器(上海)有限公司主營業(yè)務(wù)涵蓋數(shù)字化手術(shù)室,實驗室儀器,新生兒科設(shè)備,ICU重癥產(chǎn)品,堅持“質(zhì)量保證、良好服務(wù)、顧客滿意”的質(zhì)量方針,贏得廣大客戶的支持和信賴。公司力求給客戶提供全數(shù)良好服務(wù),我們相信誠實正直、開拓進(jìn)取地為公司發(fā)展做正確的事情,將為公司和個人帶來共同的利益和進(jìn)步。經(jīng)過幾年的發(fā)展,已成為數(shù)字化手術(shù)室,實驗室儀器,新生兒科設(shè)備,ICU重癥產(chǎn)品行業(yè)出名企業(yè)。