在普通PCR儀的基礎(chǔ)上增加一個熒光信號采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng)的PCR儀稱作熒光定量PCR儀。其PCR擴增原理和普通PCR儀擴增原理相同，只是PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記，使用引物和熒光探針同時與模板特異性結(jié)合擴增。擴增的結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統(tǒng)得出量化的實時結(jié)果輸出。把這種PCR儀叫做實時熒光定量PCR儀（qPCR儀）。熒光定量PCR儀有單通道、雙通道和多通道。當只用一種熒光探針標記的時候，選用單通道，有多熒光標記的時候用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標記的目的基因表達產(chǎn)物，因為一次只能檢測一種目的基因的擴增量，需多次擴增才能檢測完不同目的基因片段的量。主要用于醫(yī)學臨床檢測、生物醫(yī)藥研發(fā)、食品行業(yè)、科研院校等機構(gòu)。根據(jù)DNA擴增時升溫介質(zhì)的不同可以將PCR儀分為：變溫鋁塊式PCR儀、水浴式PCR儀和變溫式流式PCR儀。1.變溫鋁塊式PCR儀熱源用電阻絲、導電熱膜、熱泵式珀爾帖半導體元件制作，讓帶有凹孔的鋁塊升溫，用自來水、制冷壓縮機或半導體降溫。優(yōu)點：溫度傳導快，各管的擴增一致性好；反應(yīng)管規(guī)格一致時無須外涂石蠟油；可用微電腦調(diào)節(jié)溫度轉(zhuǎn)換。 而核酸檢測方法中,PCR儀無疑是本次臨床檢測的關(guān)鍵利器。上海力康基因擴增PCR儀哪個牌子好

    一對引物的Tm值相差盡量不超過2～3攝氏度，同時引物和產(chǎn)物的Tm值也不要相差太大，20攝氏度范圍內(nèi)較好。④引物的額外序列與退火溫度若有額外的序列信息要加到引物中，例如T7RNA聚合酶結(jié)合位點、限制酶切位點或者GC發(fā)夾結(jié)構(gòu)可以使用加長的引物。一般說來，引物5’端添加無關(guān)序列不會影響引物特異序列的退火。有時候，引物中添加了大量與模板不配對的堿基，可以在較低退火溫度的條件下進行4到5個擴增循環(huán)；然后在假定引物5’端序列已經(jīng)加入到模板中，計算得出的退火溫度下進行其余的循環(huán)。在引物上添加限制酶位點時一個重要的考慮是大多數(shù)限制酶的有效切割要求在它們的識別序列的5’端有2至3個非特異的額外堿基，這樣就會增加引物的非模板特異序列的長度。長引物序列的另一個缺點是影響溶解溫度的精確計算，而這對于確定PCR反應(yīng)時的退火溫度又是必須的。對于低于20個堿基的引物，Tm值可以根據(jù)Tm=4(G+C)+2(A+T)計算。而對于較長的引物，Tm值需要考慮動力學參數(shù)、從“近鄰位”的計算方式得到，現(xiàn)有的PCR引物設(shè)計軟件大多數(shù)都采用這種方式。⑤引物的3’末端核苷酸組成引物3’末端和模板的堿基完全配對對于獲得好的結(jié)果是非常重要的。 上海力康實時定量PCR儀價格便宜PCR技術(shù)是支撐現(xiàn)代分子生物學發(fā)展的一塊重要基石。

    PCR（聚合酶鏈式反應(yīng)）是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經(jīng)常是60°C左右）時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結(jié)合，再調(diào)溫度至DNA聚合酶適反應(yīng)溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。PCR儀實際就是一個溫控設(shè)備，能在95℃，55℃，72℃之間很好地進行溫度控制。PCR擴增儀又稱為PCR基因擴增儀、PCR核酸擴增儀、聚合酶鏈反應(yīng)核酸擴增儀，是利用PCR(Polymerasechainreaction，聚合酶鏈反應(yīng))技術(shù)對特定DNA擴增的一種儀器設(shè)備，被運用于醫(yī)學、生物學實驗室中，例如用于判斷檢體中是否會表現(xiàn)某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因復制以及親子鑒定等。

    1993年，美國科學家Mulis眾望所歸地獲得了諾貝爾化學獎，他所取得的成就是發(fā)明了PCR技術(shù)。PCR，中文譯為聚合酶鏈式反應(yīng)，其實是一種DNA的快速擴增技術(shù)，其擴增效率之高就象核裂變的“鏈式反應(yīng)”那樣。PCR技術(shù)通過兩個短的稱為引物的DNA小片段和一種耐熱的酶的作用，可以在3個小時內(nèi)把特定的DNA量提高1000萬倍。這種技術(shù)一問世，立刻引起了分子生物學研究的一場革命，人們利用這種轟動全世界的技術(shù)很快就把微觀領(lǐng)域的生物學研究地往前推了一步?？梢赃@么說，PCR技術(shù)使分子生物學研究一下子獲得了突破，而且隨著PCR技術(shù)的日趨完善，PCR在人類社會生活中的應(yīng)用也越來越。比如說在“DNA指紋”中我們提到，科學家們只需要一根頭發(fā)甚至一個細胞就可以完成DNA指紋的鑒定工作，這里實際上就要采用PCR技術(shù)，因為一個細胞中的DNA含量實在太少了，人們根本不可能檢測到它的指紋；有了PCR技術(shù)就好辦了，通過PCR技術(shù)把這個細胞中的DN斷擴增1000萬倍，這樣DNA量就足夠作指紋鑒定了。再比如，在醫(yī)院里檢驗血液中的某種病毒，有時病毒量極少（例如病毒攜帶者），通過傳統(tǒng)的檢查方法費力又費時，這時PCR技術(shù)也許就可以幫上忙?？梢韵冗x定這種病毒DNA上的一段DNA，設(shè)計合適的引物DNA。 熒光定量PCR儀是以熒光染料或熒光標記探針偵測每次聚合酶鏈鎖反應(yīng)（PCR）循環(huán)后產(chǎn)物總量。

1988年初，Keohanog改用T4DNA聚合酶進行PCR，其擴增的DN段很均一，真實性也較高，只有所期望的一種DN段。但每循環(huán)一次，仍需加入新酶。1988年Saiki等從溫泉中分離的一株水生嗜熱桿菌thermusaquaticus中提取到一種耐熱DNA聚合酶。此酶具有以下特點：①耐高溫，在70℃下反應(yīng)2h后其殘留活性大于原來的90%，在93℃下反應(yīng)2h后其殘留活性是原來的60%，在95℃下反應(yīng)2h后其殘留活性是原來的40%。②在熱變性時不會被鈍化，不必在每次擴增反應(yīng)后再加新酶。③提高了擴增片段特異性和擴增效率，增加了擴增長度。由于提高了擴增的特異性和效率，因而其靈敏性也提高。為與大腸桿菌多聚酶IKlenow片段區(qū)別，將此酶命名為TaqDNA多聚酶TaqDNAPolymerase。此酶的發(fā)現(xiàn)使PCR的被應(yīng)用。 PCR的特點是能將微量的DNA大幅增加。上海高校科研PCR儀制造廠家

PCR也被應(yīng)用于目標DNA的片段克隆，該技術(shù)被稱為 PCR 克隆。上海力康基因擴增PCR儀哪個牌子好

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