培養(yǎng)基的過(guò)濾澄清:液體培養(yǎng)基必須較全澄清,瓊脂培養(yǎng)基也應(yīng)透明無(wú)明顯沉淀,因此,須要采用過(guò)濾或其它澄清方法以達(dá)到此項(xiàng)要求。一般液體培養(yǎng)基可用濾紙過(guò)濾法,濾紙應(yīng)拆疊成折扇成漏斗形,以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。瓊脂培養(yǎng)基可用清潔的白色薄絨布趁熱過(guò)濾。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過(guò)濾。新制肉、肝、血和土豆等浸液時(shí)、則須先用絨布將碎渣濾去,再用濾紙反復(fù)過(guò)濾。如過(guò)濾法不能達(dá)到澄清要求、則須用蛋清澄清法。即將冷卻至55-60℃的培養(yǎng)基放入大的三角燒瓶?jī)?nèi),裝入量不得超過(guò)燒瓶容量的1/2,每1000ml培養(yǎng)基加入1-2個(gè)雞蛋的蛋白.強(qiáng)力振搖3-5分鐘,置高壓蒸汽滅菌器中、121℃加熱20分鐘、取出趁熱以絨布過(guò)濾即可。顯示屏閃爍可嘗試重置系統(tǒng)或更新固件。吉林培養(yǎng)基制備器售后
培養(yǎng)基的分裝,應(yīng)按使用的目的和要求,分裝于試管、燒瓶等適當(dāng)容器內(nèi)。分裝量不得超過(guò)容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵,其外還須用防水紙包扎(現(xiàn)試管一般多有用螺旋蓋者)。分裝時(shí)較好能使用半自動(dòng)或電動(dòng)的定量分裝器。分裝瓊脂斜面培養(yǎng)基時(shí),分裝量應(yīng)以能形成2/3底層和1/3斜面的量為洽當(dāng)。分裝容器應(yīng)預(yù)先清洗干凈并經(jīng)干烤消毒,以利于培養(yǎng)基的徹底滅菌。每批培養(yǎng)基應(yīng)另外分裝20ml培養(yǎng)基于一小玻璃瓶中,隨該批培養(yǎng)基同時(shí)滅菌,以為測(cè)定該批培養(yǎng)基較終pH之用。吉林培養(yǎng)基制備器品牌冷凝水積聚過(guò)多應(yīng)清理排水管道過(guò)濾器。
在制備培養(yǎng)基的過(guò)程中,首先要使用一些玻璃器皿,如試管、三角瓶、培養(yǎng)皿、燒杯和吸管等。這些器皿在使用前都要根據(jù)不同的情況,經(jīng)過(guò)一定的處理,洗刷干凈。有的還要進(jìn)行包裝,經(jīng)過(guò)滅菌等準(zhǔn)備就緒后,才能使用。新購(gòu)的玻璃器皿:除去包裝沾染的污垢后,先用熱肥皂水刷洗,流水沖凈,再浸泡于1~2%的工業(yè)鹽酸中數(shù)小時(shí),使游離的堿性物質(zhì)除去,再以流水沖凈。對(duì)容量較大的器皿,如大燒瓶、量筒等,洗凈后注入濃鹽酸少許,轉(zhuǎn)動(dòng)容器使其內(nèi)部表面均沾有鹽酸,數(shù)分鐘后傾去鹽酸,再以流水沖凈,倒置于洗滌架上將水空干,即可使用。
簡(jiǎn)單制作培養(yǎng)基,需要完成以下幾個(gè)主要步驟:需要對(duì)其進(jìn)行消毒處理,普通介質(zhì)使用121℃高壓蒸汽滅菌15分鐘。本發(fā)明適用于各種介質(zhì)的制備,如無(wú)特殊要求,可用于滅菌。一些熱成分,如碳水化合物,應(yīng)該單獨(dú)制備20%或更多的濃縮液,過(guò)濾或間斷殺菌,然后通過(guò)無(wú)菌操作技術(shù)加入到培養(yǎng)液中。在低溫下,明膠培養(yǎng)基也能殺菌。血、體液及素應(yīng)經(jīng)無(wú)菌處理后,加至約50℃冷卻培養(yǎng)基中。需要對(duì)培養(yǎng)基的質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)。每次處理完培養(yǎng)基,都要仔細(xì)檢查,如破損、浸漬、顏色異常、棉塞污染等,要進(jìn)行篩選和棄置,才能確定pH值。培養(yǎng)基培養(yǎng)一晚,若有細(xì)菌生長(zhǎng),培養(yǎng)基將被丟棄。常規(guī)菌株接種1×2管或瓶培養(yǎng)基,24h培養(yǎng),對(duì)生長(zhǎng)不良或無(wú)菌的菌株進(jìn)行培養(yǎng),追蹤其產(chǎn)生原因,并反復(fù)接種。如不發(fā)生變化,應(yīng)丟棄培養(yǎng)基,禁止使用。通過(guò)國(guó)際安全認(rèn)證,滿(mǎn)足生物安全實(shí)驗(yàn)室等級(jí)要求。
培養(yǎng)基配制:配制用水,培養(yǎng)基的大部分是水,所以水的質(zhì)量直接影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。按Waymouth標(biāo)準(zhǔn),水的電阻應(yīng)為200萬(wàn)歐姆,一般實(shí)驗(yàn)室里以玻璃蒸餾器制備的雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。培養(yǎng)基:培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實(shí)驗(yàn)室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基,以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)調(diào)pH至7.2-7.4,若pH值超過(guò)7.6或遠(yuǎn)低于6.8,則大多數(shù)細(xì)胞不能生長(zhǎng)。RPMI-1640不耐高壓滅菌,使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過(guò)處理。血清:培養(yǎng)中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高壓滅菌,無(wú)菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補(bǔ)體,置4℃冰箱存放待用。配制時(shí)含量視培養(yǎng)細(xì)胞種類(lèi)、時(shí)間而定,一般用10—15%。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制,可選用無(wú)血清培養(yǎng)基??焖贉缇绦蚩稍?0分鐘內(nèi)完成標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基處理。 支持固體、液體及半固體培養(yǎng)基的一體化制備。新疆全自動(dòng)培養(yǎng)基制備器
滅菌失效需驗(yàn)證溫度均勻性和保持時(shí)間。吉林培養(yǎng)基制備器售后
對(duì)LST(月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí),有時(shí)發(fā)酵管內(nèi)會(huì)有氣泡。為防止發(fā)酵管內(nèi)產(chǎn)生氣泡,可以采取以下幾項(xiàng)措施:(1)小倒管浸滿(mǎn)培養(yǎng)基(不留氣泡)后再加入到盛LST的試管中。(2)滅菌鍋關(guān)閉放氣閥前,將鍋內(nèi)氣體排干凈。(3)試管塞不要塞得太緊(使用硅膠塞的時(shí)候),勿使用橡皮塞。(4)不要過(guò)早打開(kāi)滅菌鍋,要等滅菌鍋內(nèi)氣體和溫度都降到與室溫一致或相差不大時(shí)再打開(kāi)滅菌鍋。如果以上情況都做到還有氣泡,可用水做培養(yǎng)基組的對(duì)照試驗(yàn),若培養(yǎng)基組有氣泡,而對(duì)照組沒(méi)有氣泡,可確定是培養(yǎng)基自身的原因。吉林培養(yǎng)基制備器售后