MOPS電泳緩沖液(10×, RNase free):高效、穩(wěn)定的RNA電泳解決方案在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,RNA電泳是分析RNA完整性、大小和純度的關(guān)鍵技術(shù)。然而,RNA的穩(wěn)定性較差,容易被RNase降解,因此RNA電泳中使用無RNase污染的緩沖液至關(guān)重要。MOPS電泳緩沖液(10×, RNase free)憑借其高效的緩沖能力和無RNase污染的特點(diǎn),成為RNA電泳的理想選擇。產(chǎn)品特點(diǎn)與優(yōu)勢MOPS電泳緩沖液(10×, RNase free)是一種高濃度、無RNase污染的緩沖液,主要成分包括MOPS(3-嗎啉丙磺酸)、乙酸鈉和EDTA。這種配方能夠在電泳過程中提供穩(wěn)定的pH環(huán)境,確保RNA的完整性。無RNase污染:經(jīng)過特殊處理,確保無RNase污染,能夠有效保護(hù)RNA樣品免受降解。高效緩沖能力:MOPS緩沖液的pH值接近中性(pH 7.0-7.5),能夠在電泳過程中維持穩(wěn)定的pH環(huán)境,避免RNA降解。高分辨率:MOPS緩沖液具有較低的粘度和較高的緩沖能力,能夠有效提高電泳分辨率,確保RNA條帶清晰。濃縮設(shè)計(jì):10×的高濃度設(shè)計(jì)使得該緩沖液在使用時可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求靈活稀釋,減少浪費(fèi),降低實(shí)驗(yàn)成本。使用方法使用MOPS電泳緩沖液(10×, RNase free)時,需按照以下步驟操作:配制1×工作液:根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,取適量的10×MOPS緩沖液,加入去離子水稀釋至1×工作液。,DL10000 DNA Marker憑借其高范圍的分子量覆蓋、清晰的條帶和便捷的操作,成為分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的重要工具。福建支持IND的GMP蛋白生產(chǎn)技術(shù)服務(wù)技術(shù)服務(wù)
λ DNA HindIII + EcoRI:精細(xì)的DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)λ DNA HindIII + EcoRI 是一種廣應(yīng)用于瓊脂糖凝膠電泳的DNA分子量標(biāo)準(zhǔn),由λ噬菌體DNA經(jīng)HindIII和EcoRI兩種限制性酶完全酶切后制備而成。這種酶切產(chǎn)物包含多條不同長度的DNA片段,能夠?yàn)镈NA片段的大小分析提供精確的參考。產(chǎn)品特點(diǎn)片段組成:λ DNA HindIII + EcoRI Marker 包含12-13條雙鏈DNA片段,片段大小范圍從125 bp到21,226 bp。這些片段覆蓋了從小片段到大片段的廣范圍,適用于多種DNA分析場景。即用型設(shè)計(jì):產(chǎn)品已預(yù)混1×Loading Buffer,可直接上樣,無需額外處理。穩(wěn)定性高:在-20℃下可長期保存,室溫下也能穩(wěn)定保存6個月。使用方法預(yù)熱處理:為獲得清晰的電泳圖像,建議在65℃加熱5分鐘,然后立即冰浴3分鐘。上樣量:根據(jù)加樣孔的大小,取2-5 μL直接加入瓊脂糖凝膠的加樣孔中。電泳條件:推薦使用1.0%的瓊脂糖凝膠,電泳電壓4-10 V/cm,電泳時間45分鐘。染色與觀察:電泳結(jié)束后,使用溴化乙錠(EB)或其他DNA染料染色,紫外燈下觀察。注意事項(xiàng)預(yù)熱的重要性:如果不進(jìn)行預(yù)熱處理,21,226 bp和3,530 bp的片段可能會結(jié)合形成24,756 bp的額外條帶,同時3,530 bp的亮度會明顯減弱上海純化工藝服務(wù)技術(shù)服務(wù)通過各種生物學(xué)活性測定方法,如補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒法(CDC)、細(xì)胞/生長因子信號通路阻斷法。
50×TAE是一種高濃度的緩沖液,主要成分包括Tris(三羥甲基氨基甲烷)、醋酸鈉和EDTA(乙二胺四乙酸)。它是一種常用的電泳緩沖液,廣應(yīng)用于瓊脂糖凝膠電泳中,用于分離和分析DNA片段。50×TAE的優(yōu)勢高效分離:TAE緩沖液在低濃度下具有較低的離子強(qiáng)度,適合分離大分子量的DNA片段。它能夠提供穩(wěn)定的pH環(huán)境,確保DNA在電泳過程中保持完整的結(jié)構(gòu)。兼容性強(qiáng):50×TAE適用于多種類型的瓊脂糖凝膠電泳,無論是低濃度還是高濃度的凝膠,都能提供良好的分離效果。此外,它還兼容多種核酸染料,如EB、GoldView等。經(jīng)濟(jì)實(shí)用:50×TAE的高濃度設(shè)計(jì)(50倍濃縮)使其在使用時只需稀釋至工作濃度(1×TAE),減少了儲存空間和使用成本。使用方法使用50×TAE時,通常需要將其稀釋至1×工作濃度。具體操作如下:取適量50×TAE液體。按照1:49的比例加入去離子水,使其稀釋至1×TAE。配制好的1×TAE可用于制備瓊脂糖凝膠或作為電泳槽的緩沖液。在電泳過程中,1×TAE能夠提供穩(wěn)定的電流和電壓條件,確保DNA片段在凝膠中均勻遷移。此外,TAE緩沖液在電泳結(jié)束后也便于后續(xù)的DNA回收和純化操作。保存與注意事項(xiàng)50×TAE液體應(yīng)保存在室溫或4℃條件下,避免長時間暴露在高溫或強(qiáng)光下。
畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)的密碼子優(yōu)化是提高外源蛋白表達(dá)效率的重要策略之一。密碼子優(yōu)化主要涉及以下幾個方面:1.密碼子使用偏好:通過檢查畢赤酵母基因組的密碼子偏好譜,可以確定密碼子翻譯效率和使用頻率之間的直接相關(guān)性。2.密碼子優(yōu)化策略:對目的基因進(jìn)行密碼子優(yōu)化,以適應(yīng)畢赤酵母的密碼子使用偏好。這通常包括將基因中的密碼子修改為畢赤酵母偏好的密碼子,從而提高mRNA的翻譯效率。3.GC含量調(diào)整:密碼子優(yōu)化過程中,需要考慮外源基因的GC含量,以避免由于GC含量過高或過低導(dǎo)致的mRNA結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定或轉(zhuǎn)錄提前終止的問題。4.避免稀有密碼子:去除或替換那些在畢赤酵母中使用頻率較低的稀有密碼子,以減少翻譯過程中可能出現(xiàn)的障礙。5.提高表達(dá)水平:通過密碼子優(yōu)化,可以顯著提高外源蛋白在畢赤酵母中的表達(dá)水平,有時甚至可以提高數(shù)倍到數(shù)十倍。6.基因工程應(yīng)用:在實(shí)際應(yīng)用中,例如人溶菌酶基因的密碼子優(yōu)化,通過使用畢赤酵母偏好的密碼子替換原有密碼子,成功提高了基因在畢赤酵母中的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平。DL3000 DNA Marker憑借其準(zhǔn)確的分子量范圍、清晰的條帶和便捷的操作,成為分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中不可或缺的工具。
Tris-硼酸電泳緩沖液(5×TBE, RNase free):RNA電泳的可靠選擇Tris-硼酸電泳緩沖液(5×TBE, RNase free)是一種為RNA電泳設(shè)計(jì)的緩沖液,廣應(yīng)用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中。其主要成分包括450 mM Tris-硼酸、10 mM EDTA和DEPC處理水。這種配方經(jīng)過特殊處理,確保無RNase污染,能夠有效保護(hù)RNA樣品免受降解。產(chǎn)品特點(diǎn)與優(yōu)勢無RNase污染:該緩沖液經(jīng)過DEPC處理,確保無RNase污染,適用于RNA電泳。高效分離:TBE緩沖液的緩沖能力較弱,適合分離小于2000 bp的DNA或RN片段。兼容性強(qiáng):適用于多種類型的瓊脂糖凝膠電泳,兼容常見的核酸染料(如EB或GoldView)。穩(wěn)定性高:5×TBE濃縮液比10×TBE更穩(wěn)定,不易產(chǎn)生沉淀,適合長期儲存。使用方法稀釋緩沖液:使用時需用DEPC處理水或其他RNase-free的純水將5×TBE稀釋為0.5×TBE或1×TBE工作液。制備凝膠:用稀釋后的TBE緩沖液制備瓊脂糖凝膠。電泳操作:將RNA樣品加入凝膠孔中,使用稀釋后的TBE緩沖液進(jìn)行電泳。染色與觀察:電泳結(jié)束后,使用RNase-free的核酸染料對凝膠進(jìn)行染色,并在紫外透射儀下觀察結(jié)果。保存與注意事項(xiàng)保存條件:Tris-硼酸電泳緩沖液(5×TBE, RNase free)應(yīng)保存在室溫或4℃條件下,避免長時間暴露在高溫或強(qiáng)光下。根據(jù)目標(biāo)蛋白的特性,選擇合適的表達(dá)系統(tǒng),如原核(如大腸桿菌)、真核(如酵母、)或無細(xì)胞系統(tǒng)。安徽漢遜酵母表達(dá)人膠原蛋白技術(shù)服務(wù)開發(fā)
純化后的蛋白質(zhì)需要進(jìn)行功能驗(yàn)證,如酶活性測定、結(jié)合親和力測試等,以確保其具有預(yù)期的生物學(xué)功能。福建支持IND的GMP蛋白生產(chǎn)技術(shù)服務(wù)技術(shù)服務(wù)
CRISPR-Cas9技術(shù)在金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)基因組編輯中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在以下幾個方面:1.基因敲除與功能研究:通過設(shè)計(jì)特定的sgRNA,利用CRISPR-Cas9技術(shù)可以高效地在金黃色葡萄球菌基因組中實(shí)現(xiàn)基因敲除,進(jìn)而研究這些基因的功能。例如,研究者利用CRISPR-Cas9技術(shù)成功構(gòu)建了srtA基因敲除的金黃色葡萄球菌,分析其對菌株毒力的影響。2.耐藥性研究手段開發(fā):金黃色葡萄球菌,特別是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)和耐萬古霉素金黃色葡萄球菌(VRSA),因其耐藥性帶來了巨大挑戰(zhàn)。CRISPR-Cas9技術(shù)可用于研究耐藥機(jī)制,并開發(fā)新型手段。季泉江教授課題組與韓大力研究員課題組合作,在金黃色葡萄球菌中建立了單堿基編輯技術(shù),有助于加快耐藥機(jī)制研究和藥物靶標(biāo)發(fā)現(xiàn)。3.基因編輯技術(shù)的優(yōu)化:CRISPR-Cas9技術(shù)在金黃色葡萄球菌中的應(yīng)用還包括對編輯技術(shù)的優(yōu)化。例如,研究者開發(fā)了基于CRISPR/Cas9的單質(zhì)粒系統(tǒng),允許在金黃色葡萄球菌中進(jìn)行快速有效的染色體操作,該系統(tǒng)可以實(shí)現(xiàn)無標(biāo)記、和快速的遺傳操作,加速了金黃色葡萄球菌基因功能的研究。福建支持IND的GMP蛋白生產(chǎn)技術(shù)服務(wù)技術(shù)服務(wù)