重慶qPCR法宿主細胞殘留DNA檢測
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發(fā)布時間:2025-08-11
在宿主細胞殘留 DNA(HCD)檢測試劑盒更換時,需進行系列驗證考量。首先參考《已上市生物制品藥學變更研究技術指導原則(試行)》,依對生物制品安全性、有效性和質量可控性的風險及影響程度分類,實施變更要開展充分研究與驗證 。接著做全面性能驗證,用藥典或經驗證檢測方法,證明變更后分析方法等效或更優(yōu) 。然后進行樣品檢驗,對比變更前后產品質量數(shù)據(jù)并綜合評估,借穩(wěn)定性研究開展穩(wěn)定性可比性分析,檢測細微差異,評價變更對產品質量影響 。以上完成后再進行更換試劑盒備案,若變更后方法同原方法或更優(yōu),據(jù)待檢樣品是原液或制劑,分屬中等或微小變更,微小變更可在中等變更申請時一并說明 。
rHCDpurify?前處理系統(tǒng)符合21CFR Part11要求,保證數(shù)據(jù)完整性和可追蹤性。重慶qPCR法宿主細胞殘留DNA檢測
在宿主細胞殘留 DNA 檢測中,若回收率不合格,可按以下思路排查。先看 PCS/NCS,檢查 PCS 回收率是否合格、計算公式是否正確,以及 NCS 質控是否合格 。接著排查試劑 / 耗材,確認洗滌液 B 是否過期或配制錯誤,異丙醇是否為分析純,常溫試劑有無結晶,試劑儲存溫度是否合適,磁珠是否難重懸 。再關注樣品,了解樣品殘留量、加標量是否合適,pH 值是否異常,是否含抑制因子干擾磁珠作用和 PCR 實驗 。以上排查完再審視操作過程,查看樣品是否完全消化、消化后狀態(tài)是否可流動,磁珠是否復溫,洗滌 / 洗脫中磁珠狀態(tài)、是否被誤丟棄,洗脫前磁珠是否過干燥等 。
重慶qPCR法宿主細胞殘留DNA檢測方法驗證是宿主細胞殘留 DNA 檢測的重要環(huán)節(jié),含線性、專屬性等指標。
疫苗、抗體、重組蛋白、多肽、小分子藥物等產品多采用連續(xù)傳代細胞系表達生產。雖然經過了多步純化工藝,但終產品仍可能殘留來自宿主細胞的DNA(Host cell DNA,HCD),HCD中可能包含功能基因,若其含有顯性致病基因或病毒基因組,未經驗證、充分去除或滅活的宿主細胞DNA殘留在制品中,可能通過基因水平的隨機插入突變,或是激發(fā)過度/異常的免疫原性反應,給用藥者帶來不可預測的重大健康威脅。因此,定量檢測宿主細胞殘留DNA對監(jiān)測藥物產品的安全性和質量可控性具有重要意義。
SHENTEK® MDCK 殘留 DNA 檢測試劑盒用于定量檢測各種生物制品的中間品、半成品和成品中 MDCK 宿主細胞 DNA 的試劑盒。試劑盒利用熒光探針原理,定量檢測樣品中 MDCK 殘留 DNA。檢測快速,專一性強,性能穩(wěn)定可靠,檢測限可以達到 fg 水平。試劑盒配套有 MDCK DNA 定量參考品。本試劑盒與SHENTEK®宿主細胞殘留 DNA 樣本前處理試劑盒配套使用,整個分析系統(tǒng)通過優(yōu)化前處理與檢測步驟的兼容性,明顯提升對MDCK細胞微量 DNA 殘留的回收率與定量準確度。
不同類型生物制品對宿主細胞殘留 DNA 檢測樣品處理要求不同。
湖州申科生物針對宿主細胞殘留 DNA 檢測,構建了完善開發(fā)流程。先通過生物信息學分析設計引物探針,篩選合理靶標序列、設計高效引物探針 。接著確認體系(PCR - 熒光探針法 ),標準曲線設至少 5 個濃度點,擴增效率需達 83.3% - 110%、R2≥0.980,保證專屬性與合適定量限 。然后開展方法驗證,滿足《中國藥典》四部 9101、ICH Q2 (R2) 等指導原則及申報要求 。再進行樣品檢測,遵循《中國藥典》三部 3407、USP <509> 標準,設置充分中間質控樣品,多環(huán)節(jié)把控確保檢測科學、規(guī)范、可靠,為宿主細胞殘留 DNA 檢測提供有效技術方案 。
宿主細胞殘留DNA檢測磁珠法自動化提取實現(xiàn)高通量樣品處理,提升效率。遼寧E.coli宿主細胞殘留DNA檢測方案
宿主細胞殘留DNA檢測結果需結合生產工藝進行綜合評估。重慶qPCR法宿主細胞殘留DNA檢測
SHENTEK® BHK 殘留 DNA 檢測試劑盒是用于定量分析檢測各種生物制品的中間品、半成品和成品中 BHK 宿主細胞 DNA 的試劑盒。試劑盒利用 PCR 熒光探針法原理,定量檢測樣品中 BHK 殘留 DNA。檢測快速,專一性強,性能穩(wěn)定可靠,檢測限可以達到 fg 水平。試劑盒配套有 BHK DNA 定量參考品。本試劑盒與 SHENTEK®宿主細胞殘留 DNA 樣本前處理試劑盒配套使用,可準確定量樣品中 BHK 殘留 DNA。整個分析系統(tǒng)通過優(yōu)化前處理與檢測步驟的兼容性,明顯提升對BHK細胞微量 DNA 殘留的回收率與定量準確度。
重慶qPCR法宿主細胞殘留DNA檢測