為什么定制化試劑盒是宿主細胞蛋白殘留檢測的優(yōu)先選擇？原因之一是建立定制化檢測體系，更滿足商業(yè)化生產(chǎn)HCP工藝雜質(zhì)控制要求。在HCP校準品和HCP抗體兩大關(guān)鍵試劑組分滿足要求的前提下，定制化方法的建立和優(yōu)化是基于真實純化中間品和原液樣品進行，通過優(yōu)化檢測條件，提高對低濃度HCPs的檢測靈敏度，滿足工藝驗證和過程控制要求。在臨床三期，生產(chǎn)工藝需要進行系統(tǒng)驗證，以確保其穩(wěn)定性和可重復(fù)性。定制化HCP ELISA檢測方法能夠更準確地監(jiān)測生產(chǎn)工藝中HCP的去除效果，為工藝驗證提供有力支持。在過程控制中，通過工藝特異型的HCP ELISA檢測方法，可以實時監(jiān)測生產(chǎn)過程中的HCP水平，具備更強的生產(chǎn)異常預(yù)警能力，及時發(fā)現(xiàn)生產(chǎn)風(fēng)險，確保產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。

湖州申科生物結(jié)合不同宿主實際的生產(chǎn)工藝，通過高質(zhì)量免疫原和 HCP 多抗的標準化制備流程，獲得高效價、高覆蓋率的抗體，開發(fā)了適用于大腸桿菌表達菌 (BL21) 生產(chǎn)工藝、克隆菌堿裂法提取質(zhì)粒工藝的 SHENTEK®E.coli HCP檢測試劑盒， 適用于CHO\MDCK\HEK293\Sf9\VERO\畢赤酵母等不同宿主的 HCP 檢測試劑盒。用于中間品、原液及終產(chǎn)品等的HCP定量監(jiān)測。為確保 ELISA 對HCP定量檢測的準確性，須對 HCP 抗體覆蓋率進行驗證。湖州申科抗體覆蓋率平臺采用2D Clean-up 試劑盒去除蛋白樣品的干擾物（洗滌劑、鹽、脂質(zhì)、酚類和核酸等離子污染物），并設(shè)置2D 質(zhì)控標準品進行嚴格質(zhì)控，同時以陰性抗體為對照平行試驗，以提高結(jié)果準確度。

湖州申科生物通過自主可控的供應(yīng)鏈體系與嚴格驗證的技術(shù)性能，確保HCP檢測試劑盒的長期穩(wěn)定供應(yīng)與優(yōu)異的分析能力。一方面，公司實現(xiàn)了關(guān)鍵物料的自研自產(chǎn)：校準品采用凍干工藝大規(guī)模制備，可穩(wěn)定保存10年以上；抗體通過大動物免疫獲得，產(chǎn)量可滿足≥10,000盒試劑盒的生產(chǎn)需求，保障同批次抗體持續(xù)供應(yīng)超過10年；試劑盒經(jīng)多批次驗證顯示良好的批內(nèi)與批間一致性。另一方面，所有產(chǎn)品參考ICH Q2（R2）和ICH M10法規(guī)要求完成驗證：以E.coli HCP產(chǎn)品為例，其線性范圍（243-1 ng/mL）的R2>0.999，各濃度點回收率偏差≤5%；準確度達81.2%-111.6%，中間精密度CV值5.7%-12.4%；LLOQ低至1.5 ng/mL，且對多種宿主細胞（如CHO、HEK293等）的交叉反應(yīng)均低于檢測限。同時，通過二維電泳（檢出826個蛋白點）與質(zhì)譜法（鑒定2204個蛋白點）雙重表征校準品，并采用IMBS-2D（>70%）與IMBS-MS（84.7%）正交技術(shù)驗證抗體覆蓋率，從源頭確保檢測結(jié)果的全面性與可靠性。

湖州申科生物致力于開發(fā)接近實際工藝的商業(yè)化宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒，通過不同工藝的HCP差異化分析，針對性輸出不同細分工藝領(lǐng)域的HCP檢測試劑盒。實驗數(shù)據(jù)表明：針對CHO-S與CHO-K1兩種宿主細胞，二者共享2458種共同HCP（占比79.7%），但分別存在392種與236種特異HCP，凸顯工藝差異導(dǎo)致的殘留蛋白特異性。進一步對比B3表達菌與K2克隆菌，二者雖共享1489種相同蛋白（占比88%和85%），但仍分別檢出208種和258種獨有蛋白，差異率達12%-15%。這些發(fā)現(xiàn)直接驗證不同工藝路線與克隆選擇會影響HCP殘留譜的組成。因此，湖州申科提出"工藝定制化檢測"策略——通過準確識別共性及特異HCP，針對性開發(fā)細分試劑盒產(chǎn)品。

對于HCP抗體的純化方法，目前美國藥典1132章節(jié)推薦有兩種方式，包括protein A或protein G親和柱層析法和HCP抗原親和柱層析法。兩種方法各有優(yōu)缺點，均符合監(jiān)管的要求。在實際使用過程中，這對不同產(chǎn)品可能會導(dǎo)致檢測結(jié)果的差異。兩者方法得到的抗體主要區(qū)別是HCP抗體有效含量的占比。HCP抗原親和柱層析法顯然占比高，但是也存在某些HCP抗體丟失的情況，這也會導(dǎo)致針對某些樣本的檢測結(jié)果比前者偏低，需要企業(yè)在實際方法建立時進行充分的評估。HCP抗原親和柱層析法對純化工藝要求更高，為保證抗體批間一致性，需要重點考察HCP抗原柱制備工藝、柱子的使用壽命、再制備的一致性等問題。

湖州申科在宿主細胞蛋白（HCP）ELISA檢測技術(shù)領(lǐng)域擁有深厚的積累，已成功構(gòu)建高質(zhì)量、全流程的自有開發(fā)平臺，覆蓋HCP檢測試劑盒研發(fā)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)：①抗原表征與制備：基于合規(guī)平臺的HCP Reference/Antigen制備能力，采用2D凝膠電泳等先進技術(shù)確?？乖瓗斓拇硇?。②動物免疫與抗體制備：依托自有免疫動物平臺，控制免疫原設(shè)計與動物免疫過程，產(chǎn)出高特異性、廣覆蓋度的抗體。③體系開發(fā)與驗證：憑借成熟的技術(shù)經(jīng)驗開發(fā)高靈敏度、高穩(wěn)定性的檢測體系，并嚴格遵循GMP標準完成方法學(xué)驗證。該平臺通過全流程自主可控的技術(shù)整合，從源頭保證試劑盒性能的一致性與可靠性，明顯降低不同批次試劑盒的檢測變異性。其研發(fā)的HCP ELISA試劑盒已成功服務(wù)于國內(nèi)外200余家生物醫(yī)藥企業(yè)，為生物制品（如單抗、疫苗）的工藝開發(fā)、質(zhì)量控制及法規(guī)申報（如IND/BLA）提供符合監(jiān)管要求的定制化檢測解決方案。