在小規(guī)模、快速驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)中，無細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)（CFPS）的性價(jià)比優(yōu)勢明顯。其單次反應(yīng)成本約200-500元（含商業(yè)化裂解物和模板），雖高于大腸桿菌發(fā)酵的試劑成本，但可節(jié)省大量時(shí)間——傳統(tǒng)細(xì)胞表達(dá)需3-5天（含轉(zhuǎn)化、培養(yǎng)、誘導(dǎo)），而CFPS只需4-8小時(shí)即可獲得ug-mg級蛋白，尤其適合藥物篩選、突變體庫構(gòu)建等時(shí)效性需求。例如，某CRO公司采用CFPS一周內(nèi)完成50種抗體變體的活性測試，而傳統(tǒng)方法只能完成5-10種，人力與設(shè)備成本大幅降低。芯片級體外蛋白表達(dá)??體現(xiàn)較前沿的進(jìn)展。內(nèi)源蛋白表達(dá)發(fā)展前景

eProtein Discovery系統(tǒng)：一種將無細(xì)胞蛋白合成與數(shù)字微流控相結(jié)合的快速蛋白質(zhì)原型系統(tǒng)。

傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)表達(dá)純化流程十分依賴人工操作，并且往往需要幾周甚至更久。無細(xì)胞蛋白表達(dá)的興起可將這一時(shí)間縮短至十幾個(gè)小時(shí)，但是仍需要現(xiàn)進(jìn)行表達(dá)載體的制備，體外擴(kuò)增和高通量蛋白表達(dá)然后再進(jìn)行篩選等多步操作。Nuclera將這些復(fù)雜的流程集成到eProtein Discovery系統(tǒng)。該系統(tǒng)使用基于數(shù)字微流控的智能卡盒、無細(xì)胞蛋白質(zhì)合成和熒光蛋白檢測技術(shù)，使研究人員更容易大規(guī)模獲取高質(zhì)量蛋白質(zhì)。 大腸桿菌外源蛋白表達(dá)包涵體??scFv 抗體片段的體外蛋白表達(dá)??在4小時(shí)內(nèi)完成，較傳統(tǒng)CHO 細(xì)胞系統(tǒng)提速 10 倍。

nuclera 高通量微流控蛋白表達(dá)篩選eProtein Discovery系統(tǒng)

1、從DNA到106μg純化蛋白的時(shí)間不到48小時(shí)

2、Biacore檢測證實(shí)VEGF165與貝伐珠單抗結(jié)合具有功能活性，親和力達(dá)36pM通過eProteinDiscovery系統(tǒng)進(jìn)行快速無細(xì)胞蛋白表達(dá)與純化篩選，次日即可進(jìn)行蛋白放大生產(chǎn)，這一組合縮短了獲取高質(zhì)量蛋白以在Biacore系統(tǒng)上進(jìn)行功能驗(yàn)證的時(shí)間。英國Nuclera公司由劍橋大學(xué)的博士生們于2013年創(chuàng)立。在撰寫論文期間，他們發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)難以獲取的問題是生物學(xué)領(lǐng)域的首要障礙和關(guān)鍵瓶頸。他們著手解決蛋白質(zhì)難以獲取的問題，以期改善人類健康狀況。公司的愿景是打造出從DNA到蛋白質(zhì)的原型設(shè)計(jì)系統(tǒng)，以減少在藥物發(fā)現(xiàn)計(jì)劃中獲得靶蛋白的時(shí)間和障礙。上海曼博生物是Nuclera品牌的官方代理商。

無細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)在快速響應(yīng)公共衛(wèi)生事件和jun shi應(yīng)用中表現(xiàn)突出。例如，在COVID-19期間，無細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)被用于數(shù)小時(shí)內(nèi)合成病毒抗原，加速疫苗候選物篩選。美國DARPA支持的“生物制造”項(xiàng)目利用凍干無細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)試劑，在戰(zhàn)場環(huán)境中按需生產(chǎn)止血蛋白或抗體，實(shí)現(xiàn)便攜式、無需冷鏈的即時(shí)生物制造。這類場景凸顯了無細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)在時(shí)效性和環(huán)境適應(yīng)性上的不可替代性。根據(jù)應(yīng)用需求，無細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)可整合非天然氨基酸（通過修飾tRNA）、脂質(zhì)體（用于膜蛋白表達(dá)）或翻譯后修飾酶（如糖基化酶）。優(yōu)化后的??原核體外蛋白表達(dá)??已廣泛應(yīng)用于抗體篩選、酶工程等領(lǐng)域。

無細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)（CFPS）是一種在體外（試管中）直接合成蛋白質(zhì)的技術(shù)，利用細(xì)胞裂解物（如大腸桿菌、酵母或哺乳動物細(xì)胞提取物）中的核糖體、酶、tRNA等翻譯元件，無需活細(xì)胞即可快速生產(chǎn)目標(biāo)蛋白。he xin特點(diǎn)：高效快速：省去細(xì)胞培養(yǎng)步驟，幾小時(shí)內(nèi)完成表達(dá)（傳統(tǒng)方法需數(shù)天）。靈活可控：可自由添加非天然氨基酸、同位素標(biāo)記物或翻譯調(diào)控因子，定制特殊蛋白。兼容復(fù)雜蛋白：適合表達(dá)毒性蛋白、膜蛋白等傳統(tǒng)細(xì)胞系統(tǒng)難以生產(chǎn)的類型。科學(xué)家用細(xì)菌??進(jìn)行蛋白表達(dá)??來生產(chǎn)胰島素。定制蛋白表達(dá)流程

大腸桿菌裂解物??是經(jīng)濟(jì)的體外蛋白表達(dá)平臺。內(nèi)源蛋白表達(dá)發(fā)展前景

若需實(shí)現(xiàn)高階應(yīng)用（如非天然氨基酸插入、膜蛋白合成），無細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)復(fù)雜度會明顯提升。例如，插入Azidohomoalanine需定制正交tRNA合成酶體系，且需優(yōu)化反應(yīng)中nnAA與天然氨基酸的比例；表達(dá)膜蛋白時(shí)則需添加脂質(zhì)體或納米盤以維持蛋白折疊。此類實(shí)驗(yàn)往往涉及多學(xué)科知識（合成生物學(xué)、生物化學(xué)），并依賴特殊設(shè)備（如微流控芯片工作站）。不過，隨著商業(yè)化試劑盒（如Thermo的PUREfrex2.0）和自動化平臺（如ArborBio的AI優(yōu)化系統(tǒng)）的普及，部分操作正趨于標(biāo)準(zhǔn)化，降低了技術(shù)門檻。內(nèi)源蛋白表達(dá)發(fā)展前景