英國nuclera公司由劍橋大學(xué)的博士生們于2013年創(chuàng)立。在撰寫論文期間，他們發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)難以獲取的問題是生物學(xué)領(lǐng)域的首要障礙和關(guān)鍵瓶頸。他們著手解決蛋白質(zhì)難以獲取的問題，以期改善人類健康狀況。這一驅(qū)動(dòng)力符合公司的愿景，即打造出一個(gè)從構(gòu)思到蛋白質(zhì)的原型設(shè)計(jì)系統(tǒng)，以減少在藥物發(fā)現(xiàn)計(jì)劃中獲得靶蛋白的時(shí)間和障礙。nuclera eProtein Discovery系統(tǒng)產(chǎn)品優(yōu)勢：一臺(tái)系統(tǒng)，多重優(yōu)勢；一臺(tái)系統(tǒng)，多重應(yīng)用：?未知的藥物靶點(diǎn)?難以表達(dá)的蛋白質(zhì)?AI/ML蛋白質(zhì)工程?從頭設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)?可開發(fā)性評估?氨基酸標(biāo)記；已生產(chǎn)超過1000種蛋白質(zhì)。上海曼博生物是nuclera的官方代理商，歡迎咨詢！通過灌流式反應(yīng)器將CHO細(xì)胞體外蛋白表達(dá)??周期縮短至72小時(shí)，單批次產(chǎn)量突破5g/L。hek293蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)流程

傳統(tǒng)微生物發(fā)酵生產(chǎn)工業(yè)酶面臨周期長（>72 小時(shí)）且純化復(fù)雜的瓶頸。新一代連續(xù)流體外蛋白表達(dá)系統(tǒng) 通過耦合反應(yīng)器實(shí)現(xiàn)高效合成：將大腸桿菌裂解物與纖維素酶基因模板泵入螺旋管，在 30℃ 恒溫條件下持續(xù)產(chǎn)出酶蛋白，每小時(shí)產(chǎn)量達(dá) 120 mg/L，較批次反應(yīng)提高 8 倍。德國 BRAIN AG 公司利用此技術(shù)生產(chǎn) 耐熱木聚糖酶，直接添加至造紙漿料中降解半纖維素，使漂白劑用量減少 30%。該系統(tǒng)還支持 實(shí)時(shí)補(bǔ)料——補(bǔ)充消耗的氨基酸和能量物質(zhì)可維持 48 小時(shí)穩(wěn)定表達(dá)，單位酶成本降至 $2.5/g，逼近發(fā)酵法經(jīng)濟(jì)閾值。多次跨膜蛋白表達(dá)流程優(yōu)化后的??原核體外蛋白表達(dá)??已廣泛應(yīng)用于抗體篩選、酶工程等領(lǐng)域。

將體外蛋白表達(dá)推向規(guī)模化生產(chǎn)需解決三大he xin瓶頸：裂解物制備標(biāo)準(zhǔn)化問題：不同批次細(xì)胞破碎效率差異導(dǎo)致核酸酶/蛋白酶殘留量波動(dòng)（CV>15%），造成翻譯活性離散度超20%。能量再生持續(xù)性不足：即使采用多酶耦聯(lián)再生系統(tǒng)（如pyruvate kinase,PK-肌激酶級聯(lián)），ATP濃度常在反應(yīng)啟動(dòng)6小時(shí)后衰減至閾值（<1 mM）以下，大幅限制長時(shí)程蛋白表達(dá)效率。產(chǎn)物濃度天花板效應(yīng)：受限于核糖體組裝速率（約10個(gè)核糖體/分鐘/條mRNA），當(dāng)前比較高產(chǎn)量只達(dá)5-8 g/L，較CHO細(xì)胞灌注培養(yǎng)系統(tǒng)（>10 g/L）仍有明顯差距。為突破這些限制，前沿策略聚焦于 工程化裂解物開發(fā)—通過CRISPR敲除宿主核酸酶基因（如RNase E）并將關(guān)鍵翻譯因子過表達(dá)100倍以上，使體外蛋白表達(dá)系統(tǒng)的批間穩(wěn)定性提升至CV<5%，ATP維持時(shí)間延長至24小時(shí)以上，明顯提升了工業(yè)轉(zhuǎn)化潛力。

20世紀(jì)90年代后，隨著分子生物學(xué)和合成生物學(xué)的進(jìn)步，無細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)技術(shù)迎來突破。研究者通過優(yōu)化裂解物制備（如敲除大腸桿菌核酸酶）、開發(fā)能量再生系統(tǒng)（如Phosphoenolpyruvic acid，PEP循環(huán)），明顯提升蛋白產(chǎn)量和反應(yīng)時(shí)長。2000年代初，連續(xù)交換式反應(yīng)體系（CECF）的出現(xiàn)解決了底物耗盡問題，使反應(yīng)時(shí)間延長至24小時(shí)以上，產(chǎn)量達(dá)毫克級，為工業(yè)化鋪平道路。此階段，無細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)開始應(yīng)用于毒性蛋白合成和抗體片段生產(chǎn)，但成本仍較高。體外蛋白表達(dá)技術(shù)正在改寫蛋白質(zhì)研究的??時(shí)空規(guī)則??。

無細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)（CFPS）根據(jù)反應(yīng)體系的設(shè)計(jì)可分為分批式（Batch）、雙層式（Bilayer）和連續(xù)交換式（CECF）三種主要形式。分批式是Zui基礎(chǔ)的形式，反應(yīng)在單一試管中進(jìn)行，操作簡單但受限于底物耗盡和副產(chǎn)物積累，表達(dá)時(shí)間通常只4小時(shí)，適合小規(guī)模篩選（如Promega的試劑盒）。雙層式通過密度差異將反應(yīng)液與緩沖液分層，延長反應(yīng)時(shí)間至8-20小時(shí)，日本CFS公司的產(chǎn)品采用此設(shè)計(jì)。連續(xù)交換式（CECF）通過半透膜連接反應(yīng)室與供應(yīng)室，持續(xù)補(bǔ)充底物并移除副產(chǎn)物，可將反應(yīng)延長至24小時(shí)，產(chǎn)量明顯提高（如德國RTS系統(tǒng)的1mL及以上規(guī)模產(chǎn)品）芯片級體外蛋白表達(dá)平臺(tái)在個(gè)性化醫(yī)療中尤為關(guān)鍵，能夠幫助指導(dǎo)靶向藥物選擇。gst融合蛋白表達(dá)包涵體

通過微型化??體外蛋白表達(dá)??系統(tǒng)，24小時(shí)內(nèi)測試了50種激酶抑制劑的效價(jià)。hek293蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)流程

近年來，無細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)（CFPS）市場呈現(xiàn)快速增長趨勢，主要受益于生物醫(yī)藥研發(fā)和合成生物學(xué)的需求激增。根據(jù)市場分析報(bào)告，全球CFPS市場規(guī)模預(yù)計(jì)將在2025-2030年間以15%-20%的年均復(fù)合增長率擴(kuò)張，其中北美和歐洲占據(jù)主導(dǎo)地位。多家生物技術(shù)公司（如ThermoFisher、Synthelis、ArborBiotechnologies）已推出商業(yè)化無細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)試劑盒和服務(wù)，覆蓋從科研到工業(yè)級的生產(chǎn)需求。尤其在個(gè)性化醫(yī)療和快速疫苗開發(fā)領(lǐng)域，無細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)因其短周期、高靈活性成為企業(yè)布局的重點(diǎn)，例如在mRNA疫苗生產(chǎn)中用于快速驗(yàn)證抗原設(shè)計(jì)。hek293蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)流程