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組織固定液固定時(shí)間對(duì)切片質(zhì)量影響重大
在醫(yī)學(xué)病理診斷中，組織固定是切片制作的關(guān)鍵步驟之一，而固定時(shí)間的把控更是至關(guān)重要。近日，一項(xiàng)關(guān)于組織固定液固定時(shí)間對(duì)切片影響的研究揭示了固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短對(duì)切片質(zhì)量的深遠(yuǎn)影響，為病理診斷的準(zhǔn)確性提供了新的科學(xué)依據(jù)。
組織固定是病理切片制作的首要環(huán)節(jié)，旨在通過(guò)化學(xué)固定劑的作用，使組織細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)，從而保持細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，為后續(xù)的切片和染色步驟奠定基礎(chǔ)。然而，固定時(shí)間的把控卻是一門(mén)學(xué)問(wèn)。固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，都可能對(duì)切片質(zhì)量產(chǎn)生不利影響。
當(dāng)組織固定液固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)時(shí)，會(huì)導(dǎo)致組織過(guò)度交聯(lián)。這不僅會(huì)使組織變硬，增加切片時(shí)的難度，還可能導(dǎo)致切片質(zhì)量下降，產(chǎn)生碎片。更重要的是，過(guò)度交聯(lián)會(huì)掩蓋抗原表位，降低抗原的可及性，從而影響免疫組化染色的效果。對(duì)于核酸來(lái)說(shuō)，過(guò)度固定會(huì)增加提取難度，損傷程度，降低質(zhì)量，進(jìn)而影響基因分析實(shí)驗(yàn)，如降低PCR擴(kuò)增效率，使測(cè)序結(jié)果不準(zhǔn)確。因此，長(zhǎng)時(shí)間固定雖然看似能夠確保組織結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，但實(shí)際上卻可能失去了切片質(zhì)量和后續(xù)檢測(cè)的準(zhǔn)確性。
相反，如果組織固定液固定時(shí)間過(guò)短，組織可能無(wú)法完全固定，導(dǎo)致組織自溶、細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞，影響細(xì)胞形態(tài)觀察。在免疫組化檢測(cè)中，抗原易丟失或變性，從而影響檢測(cè)結(jié)果。此外，固定不足還會(huì)使核酸酶不能有效抑制，核酸易被降解，導(dǎo)致核酸量減少、質(zhì)量下降，影響分子生物學(xué)檢測(cè)。因此，短時(shí)間固定雖然能夠節(jié)省時(shí)間，但卻可能因固定不充分而導(dǎo)致切片質(zhì)量低下，甚至影響診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性。
那么，如何確定合適的固定時(shí)間呢？這需要根據(jù)組織的類(lèi)型、大小、厚度以及所使用的固定液種類(lèi)等因素來(lái)綜合考慮。一般來(lái)說(shuō)，大多數(shù)組織在10％中性緩沖福爾馬林中應(yīng)固定6~24小時(shí)。然而，固定的時(shí)間并非一成不變，它受到多種因素的影響，如固定液的溫度、組織的含水量等。因此，在實(shí)際操作中，病理技術(shù)人員需要根據(jù)具體情況靈活調(diào)整固定時(shí)間，以獲得很好的固定效果。
組織固定液固定時(shí)間對(duì)切片質(zhì)量具有重大影響。過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短的固定時(shí)間都可能對(duì)切片質(zhì)量和后續(xù)檢測(cè)產(chǎn)生不利影響。因此，在病理切片制作過(guò)程中，需要嚴(yán)格把控固定時(shí)間，確保切片質(zhì)量和診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性。
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