VIC與 FAM 類似,是一種熒光報告基團(tuán),可標(biāo)記在引物或探針上用于熒光定量 PCR。它在 PCR 過程中,隨著引物或探針與目標(biāo) DNA 的結(jié)合以及 PCR 產(chǎn)物的擴(kuò)增,會發(fā)出特定波長的熒光,其熒光信號強(qiáng)度與 PCR 產(chǎn)物的量成正比,通過檢測熒光信號的變化來實(shí)現(xiàn)對目標(biāo) DNA 的定量分析。特點(diǎn):激發(fā)波長和發(fā)射波長與 FAM 有所不同,激發(fā)波長約為 538nm,發(fā)射波長約為 554nm,熒光顏色為黃綠色。VIC 常用于多重?zé)晒舛?PCR 中,可與 FAM 等其他熒光染料同時使用,實(shí)現(xiàn)對多個不同目標(biāo)基因的同時檢測,因?yàn)槠涔庾V特性與其他染料有較好的區(qū)分度,能避免熒光信號之間的相互干擾。光學(xué)系統(tǒng):如激發(fā)光源的強(qiáng)度和穩(wěn)定性、熒光探測器的靈敏度和噪聲水平等。泰州SYBR-Green熒光定量PCR儀
FAM并不是一種特定的熒光定量PCR儀品牌或型號,而是一種在熒光定量PCR中常用的熒光染料。FAM(Fluoresceinamidite)即羧基熒光素,具有高量子產(chǎn)率,在被特定波長的光激發(fā)后會發(fā)出強(qiáng)烈的綠色熒光,其激發(fā)波長通常在495nm左右,發(fā)射波長在520nm左右。由于其熒光特性穩(wěn)定且靈敏,被廣泛應(yīng)用于熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中,作為報告分子來對目標(biāo)DNA或RNA進(jìn)行定量檢測。很多熒光定量PCR儀都可以使用FAM染料進(jìn)行檢測,例如賽默飛世爾的QuantStudio系列、ABIStepOnePlus等。這些儀器通常配備有能激發(fā)FAM染料發(fā)光的光源以及能檢測其發(fā)射熒光的光學(xué)系統(tǒng)。以QuantStudio?1Plus實(shí)時熒光定量PCR儀為例,它配備4種常用的激發(fā)和發(fā)射濾光片,包括FAM、VIC、ROX和Cy5,其激發(fā)光源為白光LED,激發(fā)范圍為455至530nm,可滿足FAM染料的激發(fā)需求。徐州HEX熒光定量PCR儀價格實(shí)惠并且,TET 染料具有較高的熒光量子產(chǎn)率,即在受到激發(fā)后能夠高效地發(fā)出熒光。
熒光標(biāo)記探針法原理:使用一種特異性的熒光標(biāo)記探針,它能與目標(biāo) DNA 序列雜交。探針的 5' 端標(biāo)記有熒光報告基團(tuán),3' 端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)。在游離狀態(tài)下,報告基團(tuán)發(fā)出的熒光會被淬滅基團(tuán)吸收,無法檢測到熒光信號。當(dāng) PCR 反應(yīng)進(jìn)行時,DNA 聚合酶在延伸引物的過程中,會將探針?biāo)?,使報告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離,報告基團(tuán)發(fā)出的熒光信號就可以被儀器檢測到。每擴(kuò)增一條 DNA 鏈,就會有一個探針被水解,釋放出一個熒光信號,熒光信號的強(qiáng)度與 PCR 產(chǎn)物的數(shù)量成正比。過程:在 PCR 反應(yīng)的退火階段,熒光標(biāo)記探針會與目標(biāo) DNA 序列特異性結(jié)合。在延伸階段,DNA 聚合酶的 5' - 3' 外切酶活性會將探針從 5' 端開始逐個水解,使報告基團(tuán)游離出來,產(chǎn)生熒光信號。儀器會在每個循環(huán)的延伸階段檢測熒光信號的強(qiáng)度,隨著 PCR 反應(yīng)的進(jìn)行,熒光信號逐漸增強(qiáng),同樣可以得到 Ct 值。定量依據(jù):與熒光染料法類似,通過標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)待測樣本的 Ct 值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出起始模板量。由于熒光標(biāo)記探針具有特異性,能與特定的目標(biāo)序列雜交,因此可以更準(zhǔn)確地對目標(biāo)基因進(jìn)行定量分析,減少非特異性擴(kuò)增的干擾。
熒光定量 PCR 儀是一種精密的儀器,正確的維護(hù)和保養(yǎng)可以延長其使用壽命,保證儀器的性能和檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。日常維護(hù)儀器清潔:定期清理儀器表面的灰塵和污漬,使用干凈的軟布擦拭。對于儀器內(nèi)部,可使用無絨布或棉簽輕輕擦拭光路系統(tǒng)、反應(yīng)模塊等部件,避免刮傷。注意不要讓液體流入儀器內(nèi)部。檢查儀器狀態(tài):每次使用前檢查儀器的各項(xiàng)參數(shù)是否正常,如熒光檢測系統(tǒng)、加熱制冷模塊等。查看儀器的指示燈、顯示屏是否正常工作,如有異常及時記錄并聯(lián)系維修人員。及時清理樣品殘留:實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,及時清理反應(yīng)板和樣品槽中的殘留樣品,防止樣品干涸后形成頑固污漬,影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)??墒褂脺睾偷那鍧崉┎潦?,然后用蒸餾水沖洗干凈,再用干凈的軟布擦干。先進(jìn)的數(shù)據(jù)處理與分析算法能夠?qū)z測到的熒光信號進(jìn)行精確的分析和處理。
技術(shù)創(chuàng)新推動:納米熒光探針商業(yè)化落地,如量子點(diǎn)熒光標(biāo)記技術(shù)使檢測靈敏度大幅提升,推動相關(guān)設(shè)備在疾控中心的采購量增長。多模態(tài)檢測平臺興起,熒光 — 質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)在早篩領(lǐng)域的應(yīng)用,成為三甲醫(yī)院設(shè)備更新的優(yōu)先選項(xiàng)。智能化設(shè)備占比將不斷提升,2025 年智能化設(shè)備占比預(yù)計(jì)將突破 40%,AI 驅(qū)動的全流程自動化可將檢測時間大幅壓縮,誤差率也更低。市場競爭加劇:2023 年 PCR 儀市場占有率排名的品牌合計(jì)占有 70.73% 的市場份額,而 2019 年合計(jì)占有率為 94.5%,市場集中度變低,大量新玩家涌入,市場競爭變得更加激烈。各廠家不斷創(chuàng)造新的產(chǎn)品形態(tài),開辟新的應(yīng)用領(lǐng)域,以爭取更大的市場份額。減少非特異性信號的干擾,從而提高檢測的靈敏度。鎮(zhèn)江熒光定量PCR儀價格多少
一些先進(jìn)的 TET 熒光定量 PCR 儀采用了冷 CCD(電荷耦合器件)或 PMT(光電倍增管)作為熒光探測器;泰州SYBR-Green熒光定量PCR儀
熒光定量PCR儀具有高靈敏度、高特異性和精確定量等特點(diǎn),被廣泛應(yīng)用于多個行業(yè),以下是一些主要的應(yīng)用行業(yè):生命科學(xué)研究行業(yè)基因表達(dá)分析:是研究基因表達(dá)調(diào)控的重要工具,可精確測定不同組織、不同發(fā)育階段以及不同生理病理?xiàng)l件下基因的表達(dá)水平,有助于深入了解基因的功能和生物過程的分子機(jī)制?;蚬δ苎芯浚和ㄟ^對基因敲除、過表達(dá)或 RNA 干擾等模型中相關(guān)基因表達(dá)量的定量分析,驗(yàn)證基因的功能,揭示基因之間的相互作用關(guān)系。分子進(jìn)化研究:分析不同物種或同一物種不同個體之間基因泰州SYBR-Green熒光定量PCR儀