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VIC與 FAM 類似,是一種熒光報(bào)告基團(tuán),可標(biāo)記在引物或探針上用于熒光定量 PCR。它在 PCR 過程中,隨著引物或探針與目標(biāo) DNA 的結(jié)合以及 PCR 產(chǎn)物的擴(kuò)增,會(huì)發(fā)出特定波長(zhǎng)的熒光,其熒光信號(hào)強(qiáng)度與 PCR 產(chǎn)物的量成正比,通過檢測(cè)熒光信號(hào)的變化來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo) DNA 的定量分析。特點(diǎn):激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)與 FAM 有所不同,激發(fā)波長(zhǎng)約為 538nm,發(fā)射波長(zhǎng)約為 554nm,熒光顏色為黃綠色。VIC 常用于多重?zé)晒舛?PCR 中,可與 FAM 等其他熒光染料同時(shí)使用,實(shí)現(xiàn)對(duì)多個(gè)不同目標(biāo)基因的同時(shí)檢測(cè),因?yàn)槠涔庾V特性與其他染料有較好的區(qū)分度,能避免熒光信號(hào)之間的相互干擾。對(duì)于一些隱性遺傳疾病,熒光定量 PCR 儀可用于檢測(cè)個(gè)體是否為致病基因的攜帶者。蘇州JOE熒光定量PCR儀代理商
實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 儀在多個(gè)領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用,以下是一些主要的應(yīng)用領(lǐng)域:疾病診斷:可對(duì)病毒、細(xì)菌等病原體的核酸進(jìn)行檢測(cè),如、病毒、結(jié)核桿菌等,實(shí)現(xiàn)疾病的早期診斷。例如,在期間,實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 儀是檢測(cè)核酸的重要工具,通過檢測(cè)患者樣本中病毒的核酸量,判斷是否以及的程度。疾病監(jiān)測(cè):對(duì)于一些慢性疾病,如、心血管疾病等,實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 儀可監(jiān)測(cè)相關(guān)基因的變化,輔助醫(yī)生了解疾病的發(fā)展進(jìn)程、效果以及預(yù)測(cè)疾病的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。例如,通過檢測(cè)患者體內(nèi)特定基因突變的頻率和拷貝數(shù),評(píng)估的惡性程度和后的殘留情況。藥物研發(fā):在藥物研發(fā)過程中,可用于研究藥物對(duì)基因表達(dá)的影響,篩選具有潛在作用的藥物靶點(diǎn)。同時(shí),還可監(jiān)測(cè)藥物過程中患者體內(nèi)基因的變化,為個(gè)體化提供依據(jù)。例如,通過檢測(cè)患者在使用某種藥物前后腫瘤細(xì)胞中相關(guān)基因的表達(dá)水平,判斷藥物是否有效,并調(diào)整方案。南通YELLOW熒光定量PCR儀價(jià)格使熒光信號(hào)能夠更準(zhǔn)確地反映目標(biāo)核酸的真實(shí)拷貝數(shù),提高檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性。
熒光定量 PCR 儀是一種通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針,對(duì) PCR 產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤,實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)反應(yīng)過程的儀器。工作原理:在 PCR 反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè) PCR 進(jìn)程。隨著 PCR 擴(kuò)增的進(jìn)行,每經(jīng)過一個(gè)循環(huán),熒光信號(hào)就會(huì)相應(yīng)增加。通過檢測(cè)熒光信號(hào)的變化,就可以判斷 DNA 的擴(kuò)增情況,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)初始模板的定量分析。常用的熒光化學(xué)物質(zhì)有 TaqMan 熒光探針和 SYBR 熒光染料等。TaqMan 探針法中,探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;PCR 擴(kuò)增時(shí),Taq 酶的 5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)。SYBR Green Ⅰ 法中,SYBR 熒光染料特異性地?fù)饺?DNA 雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的 SYBR 染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與 PCR 產(chǎn)物的增加完全同步。
杭州柏恒熒光定量PCR儀Q9600Pro作為一款**PCR儀器,其配備了一塊,這一設(shè)計(jì)在實(shí)驗(yàn)過程中起著至關(guān)重要的作用。通過實(shí)時(shí)監(jiān)控運(yùn)行狀態(tài),用戶可以直觀地了解PCR實(shí)驗(yàn)的進(jìn)展情況,保證實(shí)驗(yàn)操作的準(zhǔn)確性和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性。,為用戶提供了更為清晰、直觀的實(shí)驗(yàn)信息展示界面。在進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)的過程中,用戶可以通過顯示屏實(shí)時(shí)監(jiān)控儀器的運(yùn)行狀態(tài)、反應(yīng)曲線、溫度曲線等關(guān)鍵數(shù)據(jù),了解實(shí)驗(yàn)進(jìn)展情況,及時(shí)發(fā)現(xiàn)異常情況并采取相應(yīng)措施。這種即時(shí)的反饋和監(jiān)控功能,有助于用戶提前發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)中可能存在的問題,減少實(shí)驗(yàn)失敗的可能性,保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。另外,,使得操作更加便捷、直觀。用戶可以通過觸摸屏或按鈕操作來(lái)進(jìn)行儀器的控制和設(shè)置,從而實(shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)操作。顯示屏上顯示的實(shí)驗(yàn)參數(shù)、曲線圖等信息清晰可見,使得用戶能夠輕松地進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的解讀。通過實(shí)時(shí)監(jiān)控運(yùn)行狀態(tài),。用戶可以隨時(shí)查看儀器的運(yùn)行日志和歷史數(shù)據(jù),了解實(shí)驗(yàn)過程中的各個(gè)環(huán)節(jié),方便進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果的復(fù)現(xiàn)和對(duì)比分析。這種數(shù)據(jù)記錄和追溯功能,有助于用戶更好地管理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),保證實(shí)驗(yàn)的可追溯性和科研成果的可靠性。 這些算法可以去除背景噪聲、校正熒光信號(hào)的漂移,并對(duì)熒光信號(hào)的變化進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和定量分析。
熒光染料法原理:一些熒光染料(如 SYBR Green I)能特異性地結(jié)合到雙鏈 DNA 上。在 PCR 反應(yīng)體系中,隨著 DNA 擴(kuò)增產(chǎn)物的不斷增加,與雙鏈 DNA 結(jié)合的熒光染料也越來(lái)越多,熒光信號(hào)強(qiáng)度與 PCR 產(chǎn)物的數(shù)量呈正相關(guān)。通過檢測(cè)熒光信號(hào)的強(qiáng)度變化,就可以實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè) PCR 反應(yīng)的進(jìn)程。過程:在 PCR 反應(yīng)的每一個(gè)循環(huán)中,當(dāng)溫度降低到退火溫度時(shí),引物與模板結(jié)合,DNA 聚合酶開始延伸引物,合成新的 DNA 鏈。此時(shí),熒光染料會(huì)結(jié)合到新合成的雙鏈 DNA 上,儀器會(huì)在特定的時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)熒光信號(hào)的強(qiáng)度。隨著循環(huán)次數(shù)的增加,熒光信號(hào)逐漸增強(qiáng),當(dāng)信號(hào)強(qiáng)度達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí),對(duì)應(yīng)的循環(huán)數(shù)被稱為閾值循環(huán)數(shù)(Ct 值)。定量依據(jù):在一定的范圍內(nèi),起始模板量與 Ct 值呈對(duì)數(shù)關(guān)系。即起始模板量越多,達(dá)到閾值所需的循環(huán)數(shù)越少,Ct 值越??;反之,起始模板量越少,Ct 值越大。通過已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,再根據(jù)待測(cè)樣本的 Ct 值,就可以在標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出其對(duì)應(yīng)的起始模板量。受到儀器的整體性能、光學(xué)系統(tǒng)設(shè)計(jì)、熒光染料質(zhì)量以及數(shù)據(jù)處理算法等多種因素的綜合影響。泰州JOE熒光定量PCR儀功能
減少非特異性信號(hào)的干擾,從而提高檢測(cè)的靈敏度。蘇州JOE熒光定量PCR儀代理商
以下是一些判斷熒光定量 PCR 儀光路系統(tǒng)是否需要校準(zhǔn)的方法:熔解曲線異常峰形改變:熔解曲線的峰形變得不規(guī)則、寬化或出現(xiàn)多個(gè)峰,而樣品和實(shí)驗(yàn)條件均無(wú)變化時(shí),可能是光路系統(tǒng)對(duì)熒光信號(hào)的檢測(cè)精度下降,導(dǎo)致熔解曲線的分析結(jié)果不準(zhǔn)確,此時(shí)需要考慮對(duì)光路系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)。Tm 值偏移:熔解曲線的 Tm 值(解鏈溫度)與預(yù)期值相比出現(xiàn)明顯偏移,且排除了引物設(shè)計(jì)、反應(yīng)條件等因素的影響,可能是光路系統(tǒng)的熒光檢測(cè)存在誤差,影響了對(duì) DNA 雙鏈解鏈過程的準(zhǔn)確監(jiān)測(cè),需要對(duì)光路進(jìn)行檢查和校準(zhǔn)。蘇州JOE熒光定量PCR儀代理商