儀器提示或報錯儀器軟件可能會提示光路系統(tǒng)出現(xiàn)故障或異常,如 “熒光信號異?!薄肮饴沸叔e誤” 等報錯信息。這是儀器自身檢測到光路系統(tǒng)存在問題,需要進行校準或維修的直接提示。儀器使用時間和環(huán)境因素使用時間:如果儀器已經(jīng)使用了較長時間,如超過一年且頻繁使用,即使沒有出現(xiàn)明顯的異常現(xiàn)象,也建議按照廠家的建議定期對光路系統(tǒng)進行校準,以確保儀器始終保持良好的性能。環(huán)境變化:儀器所處的環(huán)境發(fā)生較大變化,如溫度、濕度劇烈波動,或者儀器經(jīng)過搬運、移動后,可能會導致光路系統(tǒng)的部件發(fā)生微小位移或性能改變,此時也需要對光路系統(tǒng)進行校準,以保證檢測結果的準確性。準確的熱循環(huán)系統(tǒng)對于保證 PCR 反應的特異性和效率至關重要,進而影響檢測靈敏度。泰州YELLOW熒光定量PCR儀價格
熒光定量 PCR 儀是一種通過熒光染料或熒光標記的特異性探針,對 PCR 產(chǎn)物進行標記跟蹤,實時監(jiān)測反應過程的儀器。工作原理:在 PCR 反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個 PCR 進程。隨著 PCR 擴增的進行,每經(jīng)過一個循環(huán),熒光信號就會相應增加。通過檢測熒光信號的變化,就可以判斷 DNA 的擴增情況,進而實現(xiàn)對初始模板的定量分析。常用的熒光化學物質(zhì)有 TaqMan 熒光探針和 SYBR 熒光染料等。TaqMan 探針法中,探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR 擴增時,Taq 酶的 5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號。SYBR Green Ⅰ 法中,SYBR 熒光染料特異性地摻入 DNA 雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的 SYBR 染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與 PCR 產(chǎn)物的增加完全同步。鎮(zhèn)江JOE熒光定量PCR儀市場報價TET 熒光定量 PCR 儀配備了高靈敏度的光學檢測系統(tǒng),包括高性能的激發(fā)光源和高靈敏度的熒光探測器。
以下是判斷熒光定量 PCR 儀光路系統(tǒng)是否需要校準的方法:熔解曲線異常峰形改變:熔解曲線的峰形變得不規(guī)則、寬化或出現(xiàn)多個峰,而樣品和實驗條件均無變化時,可能是光路系統(tǒng)對熒光信號的檢測精度下降,導致熔解曲線的分析結果不準確,此時需要考慮對光路系統(tǒng)進行校準。Tm 值偏移:熔解曲線的 Tm 值(解鏈溫度)與預期值相比出現(xiàn)明顯偏移,且排除了引物設計、反應條件等因素的影響,可能是光路系統(tǒng)的熒光檢測存在誤差,影響了對 DNA 雙鏈解鏈過程的準確監(jiān)測,需要對光路進行檢查和校準。
實時熒光定量 PCR 儀在多個領域都有廣泛的應用,以下是一些主要的應用領域:作物遺傳育種:在作物遺傳改良中,可用于篩選優(yōu)良基因、鑒定雜種優(yōu)勢以及檢測轉基因作物中外源基因的整合和表達情況。例如,通過檢測與作物抗逆性、產(chǎn)量等相關基因的表達水平,篩選出具有優(yōu)良性狀的品種,加快育種進程。植物病害檢測:快速檢測植物病原體,如病毒、、細菌等,及時發(fā)現(xiàn)植物病害,采取相應的防治措施,保障農(nóng)作物的產(chǎn)量和質(zhì)量。例如,檢測果樹中的病毒情況,為果樹的病蟲害防治提供依據(jù)。這有助于及時發(fā)現(xiàn)胎兒的遺傳缺陷,為家庭提供生育決策的依據(jù),減少出生缺陷的發(fā)生。
熒光定量PCR儀具有高靈敏度、高特異性和精確定量等特點,被廣泛應用于多個行業(yè),以下是一些主要的應用行業(yè):生命科學研究行業(yè)基因表達分析:是研究基因表達調(diào)控的重要工具,可精確測定不同組織、不同發(fā)育階段以及不同生理病理條件下基因的表達水平,有助于深入了解基因的功能和生物過程的分子機制?;蚬δ苎芯浚和ㄟ^對基因敲除、過表達或 RNA 干擾等模型中相關基因表達量的定量分析,驗證基因的功能,揭示基因之間的相互作用關系。分子進化研究:分析不同物種或同一物種不同個體之間基因具備多個熒光檢測通道,可同時檢測多種熒光染料;徐州熒光熒光定量PCR儀品牌
對于一些難以培養(yǎng)或培養(yǎng)周期較長的細菌,熒光定量 PCR 儀可以快速檢測其特定的核酸序列,實現(xiàn)早期診斷。泰州YELLOW熒光定量PCR儀價格
ROX通常并不指代一種特定的熒光定量PCR儀,而是一種熒光染料,在熒光定量PCR中常被用作被動參考染料。其作用是用于校正熒光信號,減少孔與孔之間由于加樣誤差、反應體積差異、光學系統(tǒng)的微小變化以及蒸發(fā)等因素導致的熒光信號波動,提高實驗的準確性和重復性。在實時熒光定量PCR儀的使用中,很多儀器都可以兼容ROX染料進行信號校正。例如,賽默飛世爾的QuantStudio系列、ABI的7500、7900等型號的熒光定量PCR儀都支持ROX染料。不同的熒光定量PCR儀在檢測通道、光學系統(tǒng)、熱循環(huán)性能等方面存在差異,但只要其具備相應的熒光檢測通道,能夠檢測ROX染料的熒光信號,并在軟件中支持以ROX信號作為參考進行數(shù)據(jù)校正,就可以在實驗中使用ROX染料來輔助提高定量分析的準確性。例如,QuantStudio1實時熒光定量PCR儀采用新型Optiflex光學檢測架構,提供FAM、VIC和ROX三種常用激發(fā)和發(fā)射濾光片,實現(xiàn)3重實時定量分析。泰州YELLOW熒光定量PCR儀價格