熒光染料法原理：一些熒光染料（如 SYBR Green I）能特異性地結(jié)合到雙鏈 DNA 上。在 PCR 反應(yīng)體系中，隨著 DNA 擴增產(chǎn)物的不斷增加，與雙鏈 DNA 結(jié)合的熒光染料也越來越多，熒光信號強度與 PCR 產(chǎn)物的數(shù)量呈正相關(guān)。通過檢測熒光信號的強度變化，就可以實時監(jiān)測 PCR 反應(yīng)的進程。過程：在 PCR 反應(yīng)的每一個循環(huán)中，當溫度降低到退火溫度時，引物與模板結(jié)合，DNA 聚合酶開始延伸引物，合成新的 DNA 鏈。此時，熒光染料會結(jié)合到新合成的雙鏈 DNA 上，儀器會在特定的時間點檢測熒光信號的強度。隨著循環(huán)次數(shù)的增加，熒光信號逐漸增強，當信號強度達到設(shè)定的閾值時，對應(yīng)的循環(huán)數(shù)被稱為閾值循環(huán)數(shù)（Ct 值）。定量依據(jù)：在一定的范圍內(nèi)，起始模板量與 Ct 值呈對數(shù)關(guān)系。即起始模板量越多，達到閾值所需的循環(huán)數(shù)越少，Ct 值越小；反之，起始模板量越少，Ct 值越大。通過已知濃度的標準品建立標準曲線，再根據(jù)待測樣本的 Ct 值，就可以在標準曲線上計算出其對應(yīng)的起始模板量。能夠準確地識別出微弱的熒光信號變化，從而實現(xiàn)對低水平核酸表達的檢測。常州熒光定量PCR儀詢問報價

熒光定量 PCR 儀應(yīng)用領(lǐng)域：基礎(chǔ)科研基因表達分析：研究特定基因在不同組織、細胞以及不同生理狀態(tài)或處理條件下的表達水平，有助于深入理解基因的功能和調(diào)控機制。基因功能研究：通過定量分析基因表達的變化，探討基因在細胞增殖、分化、凋亡等過程中的作用，以及基因之間的相互調(diào)控關(guān)系。農(nóng)業(yè)研究：作物遺傳改良：檢測植物基因組中的突變和表達量變化，評估作物的生長發(fā)育情況和適應(yīng)性，為作物品種選育和遺傳改良提供依據(jù)。植物病蟲害檢測：快速檢測植物病原體，如病毒、細菌、等，有助于及時采取防治措施，保障農(nóng)作物產(chǎn)量和質(zhì)量。無錫Cy5熒光定量PCR儀廠家供應(yīng)在藥物研發(fā)過程中，可用于評估藥物對基因表達的影響。

ROX原理：主要用于熒光定量 PCR 中的校正和歸一化。在反應(yīng)體系中，ROX 的熒光強度相對穩(wěn)定，不受 PCR 反應(yīng)過程的影響。通過檢測 ROX 的熒光信號，可以對其他熒光染料的信號進行校正，消除由于加樣誤差、反應(yīng)體積差異、儀器波動等因素引起的熒光信號變化，提高定量結(jié)果的準確性和可靠性。特點：激發(fā)波長約為 570nm，發(fā)射波長約為 590nm，熒光顏色為紅色。ROX 通常與其他熒光染料如 FAM、VIC 等配合使用，在多重?zé)晒舛?PCR 中，為每個反應(yīng)孔提供一個穩(wěn)定的內(nèi)參熒光信號，以便對不同孔之間的熒光信號進行標準化處理。

熒光定量PCR儀的檢測結(jié)果會受到多種因素的影響，包括儀器設(shè)備、試劑質(zhì)量、樣本處理以及實驗操作等方面，以下是具體介紹：儀器設(shè)備因素?zé)嵫h(huán)系統(tǒng)：熱循環(huán)的準確性和均勻性至關(guān)重要。如果熱循環(huán)過程中溫度控制不準確，如實際溫度與設(shè)定溫度存在偏差，會導(dǎo)致PCR反應(yīng)效率不穩(wěn)定，影響擴增產(chǎn)物的產(chǎn)量和質(zhì)量，進而使檢測結(jié)果不準確。不均勻的溫度分布會使不同反應(yīng)孔之間的擴增效果產(chǎn)生差異，增加實驗誤差。熒光檢測系統(tǒng)：熒光檢測的靈敏度和準確性直接影響結(jié)果。儀器的光學(xué)部件性能不佳，如激發(fā)光源強度不足、熒光信號收集效率低，可能導(dǎo)致弱熒光信號無法被準確檢測到，影響對低拷貝數(shù)模板的定量分析。此外，熒光檢測通道之間的串擾也會干擾信號的準確測量，造成結(jié)果偏差。純度差，含有蛋白質(zhì)、多糖、酚類等雜質(zhì)，會抑制 PCR 反應(yīng)，降低擴增效率，影響熒光信號強度。

FAM并不是一種特定的熒光定量PCR儀品牌或型號，而是一種在熒光定量PCR中常用的熒光染料。FAM（Fluoresceinamidite）即羧基熒光素，具有高量子產(chǎn)率，在被特定波長的光激發(fā)后會發(fā)出強烈的綠色熒光，其激發(fā)波長通常在495nm左右，發(fā)射波長在520nm左右。由于其熒光特性穩(wěn)定且靈敏，被廣泛應(yīng)用于熒光定量PCR實驗中，作為報告分子來對目標DNA或RNA進行定量檢測。很多熒光定量PCR儀都可以使用FAM染料進行檢測，例如賽默飛世爾的QuantStudio系列、ABIStepOnePlus等。這些儀器通常配備有能激發(fā)FAM染料發(fā)光的光源以及能檢測其發(fā)射熒光的光學(xué)系統(tǒng)。以QuantStudio?1Plus實時熒光定量PCR儀為例，它配備4種常用的激發(fā)和發(fā)射濾光片，包括FAM、VIC、ROX和Cy5，其激發(fā)光源為白光LED，激發(fā)范圍為455至530nm，可滿足FAM染料的激發(fā)需求。TET 熒光染料常被用于熒光定量 PCR 實驗，它可以與其他熒光染料如 FAM、VIC 等一起；南京TET熒光定量PCR儀

TET熒光定量PCR儀能與多種 PCR 反應(yīng)體系和緩沖液兼容，不影響 PCR 擴增效率和特異性。常州熒光定量PCR儀詢問報價

核酸測序：在一些測序技術(shù)中，如熒光標記的引物測序法，VIC 熒光染料可標記在引物或測序反應(yīng)的終止子上。在測序過程中，不同堿基對應(yīng)的熒光標記會發(fā)出特定波長的熒光信號，通過檢測這些信號來確定 DNA 序列。VIC 熒光染料的使用有助于提高測序的準確性和分辨率，尤其在多重測序或高通量測序平臺中，與其他熒光染料配合使用，可實現(xiàn)對多個樣本或多個基因區(qū)域的同時測序。分子信標技術(shù)：分子信標是一種用于檢測核酸的發(fā)夾狀熒光探針，VIC 熒光染料可標記在分子信標的莖環(huán)結(jié)構(gòu)上。當分子信標與目標核酸互補結(jié)合時，其莖環(huán)結(jié)構(gòu)打開，熒光染料與淬滅基團分離，從而發(fā)出熒光信號。利用 VIC 熒光染料的這種特性，可用于實時監(jiān)測核酸的雜交過程、基因表達分析以及核酸分子的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯等研究。常州熒光定量PCR儀詢問報價