光學系統:包括光源、激發(fā)和發(fā)射濾光片、檢測器等。光源提供激發(fā)熒光染料所需的能量,濾光片用于選擇特定波長的光,檢測器負責檢測熒光信號的強度。如 ABI StepOne Plus 實時熒光定量 PCR 儀的光學系統能精確檢測不同熒光染料發(fā)出的信號。熱循環(huán)系統:用于控制 PCR 反應的溫度變化,包括變性、退火和延伸等步驟。它需要具備快速升降溫的能力,以保證 PCR 反應的高效進行。例如,Roche LightCycler 480 實時熒光定量 PCR 儀的熱循環(huán)系統升溫速度快,能有效縮短實驗時間??刂葡到y:負責儀器的操作和數據處理,可設置 PCR 反應的參數,如循環(huán)次數、溫度、時間等,還能對檢測到的熒光信號進行分析和處理,生成定量結果。光學系統:如激發(fā)光源的強度和穩(wěn)定性、熒光探測器的靈敏度和噪聲水平等。Cy5熒光定量PCR儀詢問報價
熒光定量 PCR 儀的檢測結果會受到多種因素的影響,包括儀器設備、試劑質量、樣本處理以及實驗操作等方面,以下是具體介紹:引物和探針:引物和探針的特異性、純度及濃度對檢測結果影響明顯。若引物特異性不好,可能會與非目標序列結合,產生非特異性擴增,干擾目標基因的定量。探針的質量和標記效率也會影響熒光信號的強度和穩(wěn)定性,進而影響檢測的準確性。酶的活性:Taq 酶等聚合酶的活性和穩(wěn)定性是保證 PCR 反應順利進行的關鍵。酶活性過低會導致擴增效率低下,產量不足;而酶的穩(wěn)定性差可能在反應過程中失活,使擴增反應中斷,影響結果的重復性和準確性。反應緩沖液:反應緩沖液的成分和 pH 值等條件對 PCR 反應有重要影響。不合適的緩沖液條件可能影響酶的活性、引物與模板的結合以及 DNA 的穩(wěn)定性,從而導致擴增效果不佳,檢測結果不準確。Cy5熒光定量PCR儀詢問報價具備多個熒光檢測通道,可同時檢測多種熒光染料;
ROX原理:主要用于熒光定量 PCR 中的校正和歸一化。在反應體系中,ROX 的熒光強度相對穩(wěn)定,不受 PCR 反應過程的影響。通過檢測 ROX 的熒光信號,可以對其他熒光染料的信號進行校正,消除由于加樣誤差、反應體積差異、儀器波動等因素引起的熒光信號變化,提高定量結果的準確性和可靠性。特點:激發(fā)波長約為 570nm,發(fā)射波長約為 590nm,熒光顏色為紅色。ROX 通常與其他熒光染料如 FAM、VIC 等配合使用,在多重熒光定量 PCR 中,為每個反應孔提供一個穩(wěn)定的內參熒光信號,以便對不同孔之間的熒光信號進行標準化處理。
熒光定量 PCR 儀是一種通過熒光染料或熒光標記的特異性探針,對 PCR 產物進行標記跟蹤,實時監(jiān)測反應過程的儀器。工作原理:在 PCR 反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個 PCR 進程。隨著 PCR 擴增的進行,每經過一個循環(huán),熒光信號就會相應增加。通過檢測熒光信號的變化,就可以判斷 DNA 的擴增情況,進而實現對初始模板的定量分析。常用的熒光化學物質有 TaqMan 熒光探針和 SYBR 熒光染料等。TaqMan 探針法中,探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR 擴增時,Taq 酶的 5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統可接收到熒光信號。SYBR Green Ⅰ 法中,SYBR 熒光染料特異性地摻入 DNA 雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的 SYBR 染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與 PCR 產物的增加完全同步。TET 染料與核酸的結合具有較高的特異性和穩(wěn)定性,能夠在 PCR 反應過程中準確地指示目標核酸的擴增情況;
熒光定量PCR儀的檢測結果會受到多種因素的影響,包括儀器設備、試劑質量、樣本處理以及實驗操作等方面,以下是具體介紹:儀器設備因素熱循環(huán)系統:熱循環(huán)的準確性和均勻性至關重要。如果熱循環(huán)過程中溫度控制不準確,如實際溫度與設定溫度存在偏差,會導致PCR反應效率不穩(wěn)定,影響擴增產物的產量和質量,進而使檢測結果不準確。不均勻的溫度分布會使不同反應孔之間的擴增效果產生差異,增加實驗誤差。熒光檢測系統:熒光檢測的靈敏度和準確性直接影響結果。儀器的光學部件性能不佳,如激發(fā)光源強度不足、熒光信號收集效率低,可能導致弱熒光信號無法被準確檢測到,影響對低拷貝數模板的定量分析。此外,熒光檢測通道之間的串擾也會干擾信號的準確測量,造成結果偏差。先進的數據處理與分析算法能夠對檢測到的熒光信號進行精確的分析和處理。江蘇Cy5熒光定量PCR儀經銷商
結核分枝桿菌的檢測,傳統的培養(yǎng)方法需要數周時間;Cy5熒光定量PCR儀詢問報價
熒光定量PCR儀具有高靈敏度、高特異性和精確定量等特點,被廣泛應用于多個行業(yè),以下是一些主要的應用行業(yè):食品行業(yè)食品安全檢測:可檢測食品中的致病微生物,如大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等,以及食品中的轉基因成分,保障食品安全,維護消費者的健康權益。食品溯源:通過對食品中特定 DNA 序列的檢測和分析,實現對食品原料的來源追溯和產品質量的全程監(jiān)控,有助于建立健全食品質量安全追溯體系。環(huán)境監(jiān)測行業(yè)微生物群落分析:對環(huán)境樣品中的微生物進行定量分析和群落結構研究,了解不同環(huán)境中微生物的種類、數量和分布規(guī)律,評估環(huán)境質量和生態(tài)系統的穩(wěn)定性。污染物降解菌檢測:篩選和檢測環(huán)境中具有污染物降解能力的微生物菌株,為生物修復技術提供理論依據和菌種資源,推動環(huán)境污染治理和生態(tài)修復工作的開展。Cy5熒光定量PCR儀詢問報價