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熒光定量 PCR 儀是一種通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針,對(duì) PCR 產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤,實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)反應(yīng)過程的儀器。工作原理:在 PCR 反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè) PCR 進(jìn)程。隨著 PCR 擴(kuò)增的進(jìn)行,每經(jīng)過一個(gè)循環(huán),熒光信號(hào)就會(huì)相應(yīng)增加。通過檢測(cè)熒光信號(hào)的變化,就可以判斷 DNA 的擴(kuò)增情況,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)初始模板的定量分析。常用的熒光化學(xué)物質(zhì)有 TaqMan 熒光探針和 SYBR 熒光染料等。TaqMan 探針法中,探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;PCR 擴(kuò)增時(shí),Taq 酶的 5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)。SYBR Green Ⅰ 法中,SYBR 熒光染料特異性地?fù)饺?DNA 雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的 SYBR 染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與 PCR 產(chǎn)物的增加完全同步。一些先進(jìn)的 TET 熒光定量 PCR 儀采用了冷 CCD(電荷耦合器件)或 PMT(光電倍增管)作為熒光探測(cè)器;無錫熒光熒光定量PCR儀品牌排行
熒光信號(hào)強(qiáng)度異常信號(hào)值不穩(wěn)定:在相同的實(shí)驗(yàn)條件下,對(duì)同一標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行多次檢測(cè),若熒光信號(hào)強(qiáng)度波動(dòng)較大,如原本穩(wěn)定的信號(hào)值出現(xiàn)明顯的忽高忽低,且排除了樣品制備、反應(yīng)體系等其他因素的影響,可能是光路系統(tǒng)出現(xiàn)問題,需要校準(zhǔn)。信號(hào)值偏低或偏高:與以往正常實(shí)驗(yàn)結(jié)果相比,熒光信號(hào)強(qiáng)度明顯偏低或偏高。例如,正常情況下某種樣品在特定循環(huán)數(shù)下的熒光值應(yīng)該在一定范圍內(nèi),但現(xiàn)在檢測(cè)到的數(shù)值遠(yuǎn)低于或遠(yuǎn)高于該范圍,且排除了試劑、儀器參數(shù)設(shè)置等因素,可能是光路系統(tǒng)的熒光激發(fā)或檢測(cè)效率發(fā)生變化,需要對(duì)光路系統(tǒng)進(jìn)行檢查和校準(zhǔn)。江蘇VIC熒光定量PCR儀要多少錢升降溫速度慢則會(huì)使實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長,也可能影響擴(kuò)增效率。
熒光染料法原理:一些熒光染料(如 SYBR Green I)能特異性地結(jié)合到雙鏈 DNA 上。在 PCR 反應(yīng)體系中,隨著 DNA 擴(kuò)增產(chǎn)物的不斷增加,與雙鏈 DNA 結(jié)合的熒光染料也越來越多,熒光信號(hào)強(qiáng)度與 PCR 產(chǎn)物的數(shù)量呈正相關(guān)。通過檢測(cè)熒光信號(hào)的強(qiáng)度變化,就可以實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè) PCR 反應(yīng)的進(jìn)程。過程:在 PCR 反應(yīng)的每一個(gè)循環(huán)中,當(dāng)溫度降低到退火溫度時(shí),引物與模板結(jié)合,DNA 聚合酶開始延伸引物,合成新的 DNA 鏈。此時(shí),熒光染料會(huì)結(jié)合到新合成的雙鏈 DNA 上,儀器會(huì)在特定的時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)熒光信號(hào)的強(qiáng)度。隨著循環(huán)次數(shù)的增加,熒光信號(hào)逐漸增強(qiáng),當(dāng)信號(hào)強(qiáng)度達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí),對(duì)應(yīng)的循環(huán)數(shù)被稱為閾值循環(huán)數(shù)(Ct 值)。定量依據(jù):在一定的范圍內(nèi),起始模板量與 Ct 值呈對(duì)數(shù)關(guān)系。即起始模板量越多,達(dá)到閾值所需的循環(huán)數(shù)越少,Ct 值越??;反之,起始模板量越少,Ct 值越大。通過已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,再根據(jù)待測(cè)樣本的 Ct 值,就可以在標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出其對(duì)應(yīng)的起始模板量。
熒光定量PCR儀具有高靈敏度、高特異性和精確定量等特點(diǎn),被廣泛應(yīng)用于多個(gè)行業(yè),以下是一些主要的應(yīng)用行業(yè):食品行業(yè)食品安全檢測(cè):可檢測(cè)食品中的致病微生物,如大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等,以及食品中的轉(zhuǎn)基因成分,保障食品安全,維護(hù)消費(fèi)者的健康權(quán)益。食品溯源:通過對(duì)食品中特定 DNA 序列的檢測(cè)和分析,實(shí)現(xiàn)對(duì)食品原料的來源追溯和產(chǎn)品質(zhì)量的全程監(jiān)控,有助于建立健全食品質(zhì)量安全追溯體系。環(huán)境監(jiān)測(cè)行業(yè)微生物群落分析:對(duì)環(huán)境樣品中的微生物進(jìn)行定量分析和群落結(jié)構(gòu)研究,了解不同環(huán)境中微生物的種類、數(shù)量和分布規(guī)律,評(píng)估環(huán)境質(zhì)量和生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性。污染物降解菌檢測(cè):篩選和檢測(cè)環(huán)境中具有污染物降解能力的微生物菌株,為生物修復(fù)技術(shù)提供理論依據(jù)和菌種資源,推動(dòng)環(huán)境污染治理和生態(tài)修復(fù)工作的開展。擁有高靈敏度的光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng),能夠精確檢測(cè) TET 等熒光染料發(fā)出的微弱熒光信號(hào),保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
熒光定量 PCR 儀是一種精密的儀器,正確的維護(hù)和保養(yǎng)可以延長其使用壽命,保證儀器的性能和檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。長期維護(hù):定期多方面檢查:每年或每兩年對(duì)儀器進(jìn)行一次多方面的檢查和維護(hù),包括機(jī)械部件、電子元件、制冷系統(tǒng)等的檢查和保養(yǎng)。由專業(yè)的維修工程師對(duì)儀器進(jìn)行深度保養(yǎng),及時(shí)發(fā)現(xiàn)并更換潛在的故障部件,確保儀器的整體性能處于良好狀態(tài)。存放環(huán)境維護(hù):如果儀器長時(shí)間不使用,應(yīng)將其存放在干燥、清潔、溫度適宜的環(huán)境中,避免儀器受到潮濕、灰塵、震動(dòng)和電磁干擾等影響。定期通電開機(jī),讓儀器運(yùn)行一段時(shí)間,以保持各部件的正常性能??煽焖贆z測(cè)食品中的有害微生物,如大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等。無錫Cy5熒光定量PCR儀代理商
準(zhǔn)確的熱循環(huán)系統(tǒng)對(duì)于保證 PCR 反應(yīng)的特異性和效率至關(guān)重要,進(jìn)而影響檢測(cè)靈敏度。無錫熒光熒光定量PCR儀品牌排行
杭州柏恒熒光定量PCR儀Q9600Pro采用LED光源設(shè)計(jì),這一設(shè)計(jì)不僅實(shí)現(xiàn)了節(jié)能環(huán)保,也提高了設(shè)備的穩(wěn)定性和使用壽命。LED光源作為一種高效節(jié)能的照明技術(shù),不僅減少了能源的消耗,還減少了對(duì)環(huán)境的污染,符合現(xiàn)代社會(huì)對(duì)可持續(xù)發(fā)展的要求。LED光源的節(jié)能優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在多個(gè)方面。首先,LED光源在發(fā)光過程中幾乎不會(huì)產(chǎn)生熱量,相比傳統(tǒng)的白熾燈泡或熒光燈管,LED的能源利用率更高,能夠在實(shí)驗(yàn)過程中***降低能源消耗。其次,LED光源的發(fā)光原理與傳統(tǒng)燈泡不同,LED是通過半導(dǎo)體發(fā)光,不需要加熱絲或熒光粉等材料,因此功耗更低,使用壽命更長,無需頻繁更換燈管,省去了不必要的維護(hù)費(fèi)用。此外,LED光源的長壽命也是其優(yōu)勢(shì)之一。LED的壽命通常可以達(dá)到數(shù)萬小時(shí)甚至更長,遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過傳統(tǒng)的照明設(shè)備,減少了設(shè)備的維護(hù)頻率和更換成本。LED光源具有低損耗、高穩(wěn)定性的特點(diǎn),能夠長時(shí)間保持穩(wěn)定的光照強(qiáng)度和波長,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一致性和可靠性??蒲腥藛T可以更加放心地進(jìn)行長時(shí)間實(shí)驗(yàn),而不必?fù)?dān)心光源的降解和影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。除了節(jié)能和長壽命外,LED光源還具有無汞、無紫外輻射等環(huán)保特點(diǎn)。LED光源不含有有害物質(zhì),不產(chǎn)生紫外輻射,對(duì)實(shí)驗(yàn)樣品和操作人員更加安全無害。同時(shí)。 無錫熒光熒光定量PCR儀品牌排行