標準品(Standards)是ELISA定量分析的“尺子”。它是一系列已知精確濃度的目標抗原(或抗體)溶液,濃度梯度覆蓋預期的檢測范圍(如0, 15.6, 31.2, 62.5, 125, 250, 500, 1000 pg/mL)。標準品通常由高純度的重組蛋白或天然純化蛋白配制在含有保護劑(如BSA)的緩沖液中。用戶需要嚴格按照說明書稀釋(如果需要)并隨樣品一起進行檢測。將標準品測得的信號值(OD值)對其濃度作圖,即可繪制標準曲線(通常為四參數(shù)或雙對數(shù)曲線)。通過這條曲線,才能將未知樣品的信號值轉換為濃度值。質控品(Quality Controls, QCs)則是已知濃度(通常在標準曲線范圍內的高、中、低值)但濃度對用戶保密的樣品,用于監(jiān)控整個實驗過程的準確性和精密度。運行質控品是評估試劑盒性能和操作是否正常的重要手段。某些病毒抗原檢測需在BSL-2實驗室操作。貴州進口ELISA試劑盒售價
ELISA的結果可以根據(jù)實驗目的和試劑盒設計進行不同方式的判讀:·定量分析(Quantitative):這是最常見的應用。通過精確的標準曲線,計算出樣品中目標物的***濃度(如ng/mL,pg/mL,IU/mL)。要求標準品濃度準確,曲線擬合良好(R2>0.99),樣品OD值落在曲線范圍內(比較好在中間線性好的部分)。適用于需要精確數(shù)值的研究和診斷?!ぐ攵糠治觯⊿emi-quantitative):當無法獲得或不需要***濃度值時使用。通常將樣品的OD值與標準品(或一個已知的強陽性對照)的OD值進行比較,報告為“相當于XXU/mL”或“高/中/低”?;蛘咴O定一個Cut-off值(臨界值),高于此值判為陽性,低于判為陰性。常用于大批量篩查或監(jiān)測相對變化(如***前后抗體滴度變化)?!ざㄐ苑治觯≦ualitative):主要用于判斷樣品中目標物是否存在(陽性或陰性)。同樣需要設定一個Cut-off值。Cut-off值通?;陉幮詫φ盏钠骄鵒D值加上2倍或3倍標準差(陰性均值+2SD/3SD),或基于ROC曲線分析確定。定性檢測在傳染病篩查(如HIV、HCV抗體)、妊娠檢測等中應用***。無論哪種判讀方式,設置合理的對照(空白、陰性、陽性、質控)和嚴格遵守操作規(guī)程是結果可靠性的基石。貴州進口ELISA試劑盒售價凍干粉試劑需按說明精確復溶以保證效價。
過敏性疾病(如過敏性鼻炎、***、特應性皮炎、食物過敏)日益普遍。ELISA在過敏原檢測中扮演著雙重角色:1.檢測血清中過敏原特異性IgE(sIgE):o這是體外診斷I型(速發(fā)型)過敏反應的金標準方法之一(另一種是免疫印跡/芯片)。o原理:將純化的或重組的單一過敏原(如塵螨Derp1、花生蛋白Arah2、貓毛蛋白Feld1)包被在微孔板上(或使用多孔板同時檢測多種過敏原)。加入患者血清,如果血清中含有針對該過敏原的sIgE抗體,則與之結合。洗滌后,加入酶標記的抗人IgE抗體(二抗),形成“固相過敏原-sIgE-酶標抗IgE”復合物。顯色后信號強度與sIgE含量成正比。o優(yōu)勢:可定量或半定量報告sIgE濃度(kU<sub>A</sub>/L),幫助確定致敏程度;檢測不受藥物(如抗組胺藥)影響;安全性高(無需激發(fā)試驗)。o應用:輔助診斷特定過敏原誘發(fā)的過敏性疾病,識別交叉反應性,監(jiān)測******效果。o局限性:sIgE陽性*表示致敏(Sensitization),不一定等同于臨床過敏(Allergy),需結合病史解讀;無法檢測非IgE介導的過敏反應;檢測種類受限于包被的過敏原。
食品安全關乎公眾健康。ELISA憑借其快速、靈敏、高通量、相對低成本的優(yōu)勢,成為食品中危害因子(病原微生物、***、農獸藥殘留、非法添加物、過敏原)檢測的重要工具?!z測靶標與模式:o食源***原菌及其***:沙門氏菌、大腸桿菌O157:H7、李斯特菌、金黃色葡萄球菌腸***等。常用夾心法檢測菌體抗原或***蛋白。o******(Mycotoxins):黃曲霉***B1(AFB1)、赭曲霉***A(OTA)、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON嘔吐***)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、伏馬菌素(FUM)等。多為小分子,采用競爭法ELISA。o農藥殘留(PesticideResidues):有機磷、氨基甲酸酯、擬除蟲菊酯類等殺蟲劑;三嗪類、磺酰脲類除草劑等。競爭法檢測。o獸藥殘留(VeterinaryDrugResidues):***(如β-內酰胺類、磺胺類、四環(huán)素類、氯霉素)、合成***(如己烯雌酚DES)、β-受體激動劑(如克倫特羅,“瘦肉精”)等。競爭法檢測。o過敏原(Allergens):檢測食品中殘留的花生、牛奶、雞蛋、麩質、堅果、芝麻、甲殼類等過敏原蛋白,用于生產交叉污染監(jiān)控和成品檢測。夾心法。o非法添加物:如三聚氰胺(奶制品)、蘇丹紅(辣椒制品)等。競爭法或夾心法(針對蛋白摻假)。其組成部分包括包被板、酶標抗體和顯色底物。
獲得穩(wěn)定的顯色信號后,需要使用酶標儀(MicroplateReader)在特定波長下測量吸光度(OpticalDensity,OD值)?!OPD終止后:測量492nm。opNPP(ALP系統(tǒng)):測量405nm?!x器校準與設置:確保酶標儀經過校準。使用潔凈的微孔板底板。·空白校正:讀取前,務必設置好空白孔(通常只含底物和終止液,不加任何生物組分)。儀器軟件通常會自動用空白孔的平均值對所有孔的OD值進行歸零校正(BlankSubtraction)?!?shù)據(jù)導出:將校正后的OD值導出到數(shù)據(jù)處理軟件(如Excel,GraphPadPrism,或試劑盒配套軟件)?!だL制標準曲線:以標準品濃度(X軸,通常取對數(shù))對對應的平均OD值(Y軸)作圖。選擇合適的數(shù)學模型進行擬合:o四參數(shù)邏輯斯蒂(4-ParameterLogistic,4PL)曲線:**常用,能很好地擬合S型曲線,尤其在高濃度和低濃度平臺區(qū)。o對數(shù)-對數(shù)(Log-Log)曲線:將濃度和OD值都取對數(shù)后線性擬合,適用于中間線性范圍較好的情況?!び嬎阄粗獦悠窛舛龋菏褂脭M合好的標準曲線方程,將未知樣品的平均OD值代入,即可計算出其濃度。注意樣品稀釋倍數(shù)。軟件通常能自動完成計算?!べ|控評估:檢查質控品(QC)的測定值是否在其預期范圍內(如均值±2SD或說明書規(guī)定的范圍)。國際品牌如R&D Systems的試劑盒質量較有保障。遼寧哪里有ELISA試劑盒銷售價格
標準曲線的R2值應大于0.99方為有效。貴州進口ELISA試劑盒售價
**標志物(TumorMarkers)是指由腫瘤細胞本身產生或由機體對**反應而產生的、可存在于血液、體液或組織中的生物分子。ELISA是檢測循環(huán)**標志物(血清/血漿)**常用的技術之一,用于:·輔助診斷:某些標志物升高提示特定**存在的可能性(需結合影像學、病理學確診)。例如:o甲胎蛋白(AFP):原發(fā)性肝細胞*、生殖細胞**。o*胚抗原(CEA):結直腸*、胃*、胰腺*、肺*、乳腺*等(廣譜但特異性不高)。o前列腺特異性抗原(PSA):前列腺*篩查(爭議較大)及***后監(jiān)測。o糖類抗原CA125:卵巢*。o糖類抗原CA15-3:乳腺*。o糖類抗原CA19-9:胰腺*、膽管*。貴州進口ELISA試劑盒售價
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