HCP是由宿主細胞（通常是哺乳動物細胞或微生物）產(chǎn)生的蛋白質(zhì)。這些蛋白質(zhì)具有潛在的風險，可能會影響藥物的安全性和有效性。因此，HCP殘留量是生物藥物中一個關(guān)鍵質(zhì)量屬性，要求在藥物的開發(fā)和生產(chǎn)階段對HCP的存在進行嚴格的監(jiān)控、管理和記錄。隨著生產(chǎn)流程，生物制品的純度在逐漸提高，HCPs總量和種類卻在持續(xù)降低，這使得對HCP的分析和監(jiān)測工作變得更加具有挑戰(zhàn)性。在這種情況下，開發(fā)高效的HCP富集材料和技術(shù)變得尤為關(guān)鍵。低豐度宿主殘留蛋白富集試劑盒，專為生物制品（如單抗、融合蛋白等）中HCP的富集和去除高豐度蛋白而設(shè)計，利用磁珠法構(gòu)建了一個多樣化且復雜的親和配體庫，旨在高效地識別并結(jié)合目標蛋白。其設(shè)計不僅針對傳統(tǒng)的單一蛋白，還能適用于融合蛋白、單克隆抗體等多種生物樣本類型，展現(xiàn)了較強的適用性和靈活性。

湖州申科生物通過自主可控的供應(yīng)鏈體系與嚴格驗證的技術(shù)性能，確保HCP檢測試劑盒的長期穩(wěn)定供應(yīng)與優(yōu)異的分析能力。一方面，公司實現(xiàn)了關(guān)鍵物料的自研自產(chǎn)：校準品采用凍干工藝大規(guī)模制備，可穩(wěn)定保存10年以上；抗體通過大動物免疫獲得，產(chǎn)量可滿足≥10,000盒試劑盒的生產(chǎn)需求，保障同批次抗體持續(xù)供應(yīng)超過10年；試劑盒經(jīng)多批次驗證顯示良好的批內(nèi)與批間一致性。另一方面，所有產(chǎn)品參考ICH Q2（R2）和ICH M10法規(guī)要求完成驗證：以E.coli HCP產(chǎn)品為例，其線性范圍（243-1 ng/mL）的R2>0.999，各濃度點回收率偏差≤5%；準確度達81.2%-111.6%，中間精密度CV值5.7%-12.4%；LLOQ低至1.5 ng/mL，且對多種宿主細胞（如CHO、HEK293等）的交叉反應(yīng)均低于檢測限。同時，通過二維電泳（檢出826個蛋白點）與質(zhì)譜法（鑒定2204個蛋白點）雙重表征校準品，并采用IMBS-2D（>70%）與IMBS-MS（84.7%）正交技術(shù)驗證抗體覆蓋率，從源頭確保檢測結(jié)果的全面性與可靠性。

目前通過Vero細胞培養(yǎng)的病毒有狂犬病病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒等，種類繁多，工藝也各有千秋。湖州申科生物Vero細胞裂解型HCP殘留檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法）針對工藝過程中Vero細胞裂解后產(chǎn)生的大量不同種類的HCPs，可定量檢測使用Vero細胞系生產(chǎn)并通過細胞裂解工藝收獲的生物制品中宿主細胞蛋白的殘留檢測，抗體與校準品可覆蓋近3000種蛋白。試劑盒操作簡便，提高實驗人員的時間利用率。試劑盒抗體覆蓋率為65.1%-85.1%（IMBS-2D）和76.9%(IMBS-MS，Unique Peptide≥2）。試劑盒嚴格遵循ISO13485質(zhì)量體系進行生產(chǎn)，并按照法規(guī)要求進行了性能驗證，各項性能滿足Vero宿主細胞蛋白檢測需求。

湖州申科生物CHO-K1 HCP 殘留檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法）基于固相酶聯(lián)免疫吸附分析法，適用于基于CHO-K1細胞生產(chǎn)的生物制品中宿主殘留蛋白的定量檢測。該分析方法通過在預包被抗CHO-K1HCPs綿羊多抗的酶標板中加入校準品或待測樣品、HRP標記的抗CHO-K1HCPs綿羊多抗進行共孵育。洗滌后，加入TMB底物進行顯色反應(yīng)，再使用終止液終止酶催化反應(yīng)。利用酶標儀在450nm波長下測讀吸光度，其吸光度與校準品或待測樣品中的HCPs濃度成正相關(guān)，通過校準品擬合的劑量-反應(yīng)曲線即可計算得出待測樣品中HCPs的濃度。本試劑盒對待測樣品無需進行特殊處理，只需通過合適的稀釋比例進行適用性驗證即可直接使用。本試劑盒操作步驟少，快速，檢測專一性強，性能穩(wěn)定可靠。

各國法規(guī)要求必須對生物藥品進行分析和純化，以將宿主細胞蛋白HCP降低到可接受的水平；即使終產(chǎn)品中痕量的宿主細胞蛋白HCP到達患者體內(nèi)，尚不清楚特定的殘留蛋白質(zhì)雜質(zhì)是否會影響藥物的穩(wěn)定性或免疫原性。關(guān)于HCP的限量標準，美國藥典推薦值為終產(chǎn)品的HCP水平1-100 ng/mg；中國藥典各論中E.coli菌體HCP應(yīng)不高于蛋白質(zhì)總量的0.10% (1000 ng/mg)，CHO細胞HCP應(yīng)不高于蛋白質(zhì)總量的0.05% (500 ng/mg)，假單胞菌HCP應(yīng)不高于蛋白質(zhì)總量的0.02% (200 ng/mg)。

LC-MS技術(shù)作為生物制品宿主細胞蛋白殘留檢測新趨勢，需考慮以下幾點：①穩(wěn)定性：需要HCPs LC-MS檢測流程進行驗證，全流程都需要有嚴格的QC控制，確保檢測結(jié)果的一致性和穩(wěn)定性。②可重復性：不同類型生物制品中HCPs提取效率不同，不同人員操作存在差異，需要在上機前通過不同方法評估HCPs的提取效率，避免人為因素造成結(jié)果重復性差。③準確度：方法開發(fā)與驗證階段，通過設(shè)立內(nèi)標與定量算法，根據(jù)內(nèi)標響應(yīng)回算得到HCPs的含量，確保定量結(jié)果的準確性。④抗干擾能力：高豐度蛋白和特殊基質(zhì)會對質(zhì)譜檢測產(chǎn)生影響，需要通過前處理手段對高豐度蛋白或特殊的基質(zhì)進行去除，以減少其對HCPs肽段在質(zhì)譜檢測時的影響。⑤真實性：樣品中除HCPs以外的物質(zhì)在質(zhì)譜分析中同樣會產(chǎn)生質(zhì)譜信號，需要去除復雜的背景噪音避免假陽性和假陰性的出現(xiàn)，建立合理標準的生信分析流程。分析流程建立過程中同樣需要建立嚴格的質(zhì)控QC標準，并通過后期不同方法進行驗證，確定其標準的真實性。