宿主細(xì)胞蛋白（HCP）作為生物制品中來(lái)源于細(xì)胞基質(zhì)的殘留雜質(zhì)，具有明顯的異質(zhì)性特征。其復(fù)雜性體現(xiàn)在三個(gè)方面：①理化特性差異：HCP涵蓋胞內(nèi)及分泌蛋白，涉及關(guān)鍵生理功能，具有涵蓋區(qū)間大的等電點(diǎn)（pI 3-11）、分子量范圍（5-250kDa）及疏水性；②上游工藝影響：不同發(fā)酵工藝（如細(xì)胞株、培養(yǎng)條件）誘導(dǎo)獨(dú)特的翻譯后修飾（PTM），導(dǎo)致HCP總量與生化復(fù)雜性增加；③下游工藝與產(chǎn)物特性干擾：抗體、細(xì)胞因子等重組蛋白或病毒類藥物的純化工藝會(huì)選擇性殘留特定HCP，且產(chǎn)物形式（如大腸桿菌的包涵體/可溶性表達(dá)）直接影響HCP殘留譜。針對(duì)特定生產(chǎn)工藝開發(fā)定制化檢測(cè)方案是準(zhǔn)確監(jiān)控宿主細(xì)胞蛋白殘留的關(guān)鍵。

湖州申科生物推出的宿主細(xì)胞殘留蛋白檢測(cè)全自動(dòng) ELISA 分析系統(tǒng)，整合了標(biāo)曲制備、樣本加樣、恒溫孵育、板孔清洗及結(jié)果檢測(cè)等全流程功能。系統(tǒng)搭載的高精度前處理模塊與檢測(cè)模塊，通準(zhǔn)確控制實(shí)驗(yàn)參數(shù)，有效減少人為操作誤差，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性與準(zhǔn)確性。其多模塊單獨(dú)運(yùn)行設(shè)計(jì)，可實(shí)現(xiàn)不同檢測(cè)任務(wù)的并行處理，大幅縮短實(shí)驗(yàn)周期，明顯提升整體實(shí)驗(yàn)效率。在保障結(jié)果可靠的基礎(chǔ)上，該系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了 ELISA 實(shí)驗(yàn)的自動(dòng)化操作、標(biāo)準(zhǔn)化流程與快速化輸出，降低了對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的技能要求，同時(shí)通過優(yōu)化資源配置減少檢測(cè)成本。此外，系統(tǒng)內(nèi)置完善的數(shù)據(jù)管理功能，可滿足實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)完整性記錄與全流程審計(jì)追蹤需求，嚴(yán)格符合 21 CFR Part 11 法規(guī)要求，并配備三級(jí)權(quán)限管理機(jī)制，進(jìn)一步保障實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的安全性與規(guī)范性。

美國(guó)藥典USP通則<1132.1> Residual Host Cell Protein Measurement in Biopharmaceuticals by Mass Spectrometry（質(zhì)譜法測(cè)定生物藥中殘留宿主細(xì)胞蛋白）主要介紹了LC-MS技術(shù)在宿主細(xì)胞殘留蛋白檢測(cè)中的應(yīng)用，從樣品制備、質(zhì)譜測(cè)試條件的建立、數(shù)據(jù)的分析、質(zhì)譜方法驗(yàn)證等多個(gè)方面，詳細(xì)闡述了質(zhì)譜技術(shù)在HCPs中應(yīng)用的優(yōu)勢(shì)與注意事項(xiàng)。作為一種先進(jìn)的分析技術(shù)平臺(tái)，質(zhì)譜技術(shù)在HCPs分析中的應(yīng)用，以及與ELISA方法和其他分析方法結(jié)合使用，有助于生產(chǎn)企業(yè)在產(chǎn)品的整個(gè)生命周期中更好地理解和建立HCPs的檢測(cè)方法，保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定。

對(duì)于HCP抗體的純化方法，目前美國(guó)藥典1132章節(jié)推薦有兩種方式，包括protein A或protein G親和柱層析法和HCP抗原親和柱層析法。兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，均符合監(jiān)管的要求。在實(shí)際使用過程中，這對(duì)不同產(chǎn)品可能會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的差異。兩者方法得到的抗體主要區(qū)別是HCP抗體有效含量的占比。HCP抗原親和柱層析法顯然占比高，但是也存在某些HCP抗體丟失的情況，這也會(huì)導(dǎo)致針對(duì)某些樣本的檢測(cè)結(jié)果比前者偏低，需要企業(yè)在實(shí)際方法建立時(shí)進(jìn)行充分的評(píng)估。HCP抗原親和柱層析法對(duì)純化工藝要求更高，為保證抗體批間一致性，需要重點(diǎn)考察HCP抗原柱制備工藝、柱子的使用壽命、再制備的一致性等問題。

宿主細(xì)胞蛋白來(lái)源中往往同時(shí)存在核酸，胞膜脂類，培養(yǎng)基中的氨基酸等非HCP成分會(huì)干擾總蛋白的檢測(cè)準(zhǔn)確性，需要在檢測(cè)之前進(jìn)行純化前處理，同時(shí)對(duì)總蛋白檢測(cè)方法進(jìn)行方法學(xué)確認(rèn)。HCP是一種多蛋白質(zhì)的混合物，總蛋白定量方法之間檢測(cè)結(jié)果會(huì)存在一定程度的差異，這也是導(dǎo)致HCP免疫檢測(cè)方法結(jié)果差異的原因之一。若HCP蛋白定量方法間檢測(cè)結(jié)果差異較大，一般同時(shí)采用2種以上經(jīng)過確認(rèn)的方法檢測(cè)，再取均值?？偟鞍讬z測(cè)方法的定量限一般只能達(dá)到μg/mL水平,但是HCP檢測(cè)試劑盒的產(chǎn)品校準(zhǔn)品在ng/mL水平。從HCP高濃度原液稀釋到低濃度產(chǎn)品校準(zhǔn)品中存在稀釋誤差，需要對(duì)產(chǎn)品校準(zhǔn)品進(jìn)行重新標(biāo)定賦值。

影響宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測(cè)結(jié)果的因素之一是樣品質(zhì)量。HCP檢測(cè)貫穿生物制品生產(chǎn)的全過程，涉及收獲、純化、制備等多個(gè)步驟。在不同樣品基質(zhì)下，HCP檢測(cè)可能存在巨大差異。例如，對(duì)于含有佐劑的疫苗，由于佐劑的干擾，難以在成品中對(duì)HCP項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)，因此一般在吸附工藝之前的原液階段進(jìn)行檢測(cè)。此外樣品的收集、處理和保存方式對(duì)檢測(cè)結(jié)果至關(guān)重要。不正確的處理可能導(dǎo)致蛋白降解或變性，從而影響檢測(cè)結(jié)果。例如，若采用歷史批樣品作為內(nèi)部質(zhì)控品，應(yīng)結(jié)合其穩(wěn)定性數(shù)據(jù)合理制定保存條件及保存期限，以保證檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。