全球快速增長(zhǎng)的抗體、蛋白類(lèi)藥物等生物藥由相應(yīng)工程細(xì)胞生產(chǎn)。生物制品藥物生產(chǎn)過(guò)程中的宿主內(nèi)源性蛋白，被稱(chēng)為宿主細(xì)胞蛋白（Host Cell Proteins, HCPs）會(huì)隨著不同工藝流程部分殘留在藥物中。宿主細(xì)胞殘留蛋白作為外源蛋白可能會(huì)在不同程度上引發(fā)機(jī)體的免疫應(yīng)答，導(dǎo)致過(guò)敏反應(yīng)或其它不良反應(yīng)；另外還有一些殘留HCPs具有蛋白酶或脂酶的活性，可能導(dǎo)致蛋白藥物或輔料的降解，進(jìn)而增加藥物產(chǎn)品的質(zhì)量和療效的不穩(wěn)定性?；诖?，對(duì)藥物中HCPs的定性與定量檢測(cè)就顯得尤為重要。全球各國(guó)藥典如美國(guó)藥典，歐洲藥典以及中國(guó)藥典都對(duì)HCPs檢測(cè)提出了具體要求和標(biāo)準(zhǔn)。

LC-MS/MS 作為一種成熟可靠的蛋白質(zhì)組分析技術(shù)，憑借其超高的分辨率與準(zhǔn)確度在生物分析領(lǐng)域占據(jù)重要地位。該技術(shù)不僅能實(shí)現(xiàn)對(duì)低含量宿主細(xì)胞殘留蛋白（HCP）的定性檢測(cè)，還可通過(guò)建立專(zhuān)屬蛋白質(zhì)譜庫(kù)準(zhǔn)確鑒定 HCP 的具體種類(lèi)，為深入解析殘留蛋白組成提供關(guān)鍵支撐。不過(guò)，其應(yīng)用過(guò)程中面臨的關(guān)鍵挑戰(zhàn)在于，如何優(yōu)化 LC-MS 方法以滿(mǎn)足 GMP 規(guī)范中對(duì)產(chǎn)品放行檢測(cè)的嚴(yán)格要求。在質(zhì)譜檢測(cè)環(huán)節(jié)，通過(guò)引入表征清晰的內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)蛋白，能夠準(zhǔn)確分析 HCPs 的整體組成，并有效鑒別其中具有潛在風(fēng)險(xiǎn)的高風(fēng)險(xiǎn)蛋白。這一技術(shù)手段不僅為開(kāi)發(fā)產(chǎn)品專(zhuān)屬的 HCP ELISA 檢測(cè)方法提供有力數(shù)據(jù)支持，還能助力工藝優(yōu)化升級(jí)，加速推動(dòng)生物制品從研發(fā)到獲批上市的全流程進(jìn)程。

為了更好地控制工藝和保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定，各國(guó)監(jiān)管機(jī)構(gòu)均要求提供使用的宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測(cè)ELISA試劑盒的抗體覆蓋率數(shù)據(jù)。一般需進(jìn)行覆蓋率分析的場(chǎng)景一般有以下幾種情況：①臨床II期后，若是繼續(xù)使用商品化試劑盒，則需要評(píng)估試劑盒抗體覆蓋率是否可以繼續(xù)用于質(zhì)量監(jiān)控；②臨床III期及以后階段，產(chǎn)品研究者開(kāi)發(fā)了平臺(tái)化或工藝專(zhuān)屬型的HCP監(jiān)測(cè)方法，該類(lèi)試劑盒在使用前要評(píng)估覆蓋率水平與商業(yè)化覆蓋水平的差異；③申報(bào)時(shí)沒(méi)有提交覆蓋率數(shù)據(jù)，監(jiān)管機(jī)構(gòu)可能會(huì)對(duì)企業(yè)提出發(fā)補(bǔ)的要求；④產(chǎn)品上市后發(fā)生了包括生產(chǎn)場(chǎng)地變更，工藝變更，HCP分析方法變更等因素的變更，研究者則需要評(píng)估變更前后抗體覆蓋率水平的差異，以及該差異對(duì)藥品質(zhì)量與安全帶來(lái)的影響。

HCP是由宿主細(xì)胞（通常是哺乳動(dòng)物細(xì)胞或微生物）產(chǎn)生的蛋白質(zhì)。這些蛋白質(zhì)具有潛在的風(fēng)險(xiǎn)，可能會(huì)影響藥物的安全性和有效性。因此，HCP殘留量是生物藥物中一個(gè)關(guān)鍵質(zhì)量屬性，要求在藥物的開(kāi)發(fā)和生產(chǎn)階段對(duì)HCP的存在進(jìn)行嚴(yán)格的監(jiān)控、管理和記錄。隨著生產(chǎn)流程，生物制品的純度在逐漸提高，HCPs總量和種類(lèi)卻在持續(xù)降低，這使得對(duì)HCP的分析和監(jiān)測(cè)工作變得更加具有挑戰(zhàn)性。在這種情況下，開(kāi)發(fā)高效的HCP富集材料和技術(shù)變得尤為關(guān)鍵。低豐度宿主殘留蛋白富集試劑盒，專(zhuān)為生物制品（如單抗、融合蛋白等）中HCP的富集和去除高豐度蛋白而設(shè)計(jì)，利用磁珠法構(gòu)建了一個(gè)多樣化且復(fù)雜的親和配體庫(kù)，旨在高效地識(shí)別并結(jié)合目標(biāo)蛋白。其設(shè)計(jì)不僅針對(duì)傳統(tǒng)的單一蛋白，還能適用于融合蛋白、單克隆抗體等多種生物樣本類(lèi)型，展現(xiàn)了較強(qiáng)的適用性和靈活性。

湖州申科生物憑借其先進(jìn)的整合技術(shù)平臺(tái)在HCP檢測(cè)領(lǐng)域建立起優(yōu)勢(shì)。公司通過(guò)自主研發(fā)突破性技術(shù)—包括基于IMBS的抗體覆蓋率檢測(cè)方法和基于核酸文庫(kù)的低豐度HCP富集技術(shù)，提升了HCP檢測(cè)的靈敏度和HCP抗體覆蓋能力，相關(guān)成果已發(fā)表于《中國(guó)新藥雜志》《藥物分析雜志》等期刊并納入國(guó)家科技重大專(zhuān)項(xiàng)。同時(shí)，依托前沿的精密分析平臺(tái)，湖州申科構(gòu)建了覆蓋完整HCP分析鏈條的LC-MS解決方案，涵蓋抗原一致性評(píng)價(jià)、IMBS前處理、低豐度蛋白富集、生信分析及專(zhuān)屬數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建等關(guān)鍵環(huán)節(jié)，形成從樣品管理到風(fēng)險(xiǎn)分析的閉環(huán)體系。該平臺(tái)嚴(yán)格依照法規(guī)要求，所有檢測(cè)技術(shù)均通過(guò)符合ICH及藥典要求的方法學(xué)驗(yàn)證，確保數(shù)據(jù)可靠并滿(mǎn)足生物制品申報(bào)（如IND/BLA）的法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)。憑借這一技術(shù)整合能力，公司已為全球200余家生物醫(yī)藥企業(yè)提供從工藝開(kāi)發(fā)到質(zhì)控放行的一站式HCP檢測(cè)服務(wù)，賦能單抗、疫苗等產(chǎn)品的安全性與合規(guī)性提升。

湖州申科采用免疫磁珠分離（IMBS）結(jié)合 2D 電泳或者 LC-MS 的方法評(píng)估抗體覆蓋率。IMBS主要流程包括多克隆抗體與磁珠偶聯(lián)，磁珠未結(jié)合位點(diǎn)的封閉，HCP樣本與結(jié)合抗體的磁珠共同孵育，此過(guò)程中 HCP 抗體結(jié)合可以識(shí)別的 HCP，而未識(shí)別的 HCP 則通過(guò)后續(xù)洗滌步驟去除，再通過(guò)低 pH等洗脫條件收集抗體捕獲的HCP。該方法擁有 AAE(Antibody Affinity Extraction)免疫層析柱分離的所有優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)免疫磁珠可以在懸浮的條件下與 HCP樣品充分混勻結(jié)合，HCP結(jié)合效果更佳，由于采用磁珠吸附可以減少 HCP與填料的非特異性吸附，提高實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性。