對(duì)于HCP抗體的純化方法，目前美國(guó)藥典1132章節(jié)推薦有兩種方式，包括protein A或protein G親和柱層析法和HCP抗原親和柱層析法。兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，均符合監(jiān)管的要求。在實(shí)際使用過(guò)程中，這對(duì)不同產(chǎn)品可能會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的差異。兩者方法得到的抗體主要區(qū)別是HCP抗體有效含量的占比。HCP抗原親和柱層析法顯然占比高，但是也存在某些HCP抗體丟失的情況，這也會(huì)導(dǎo)致針對(duì)某些樣本的檢測(cè)結(jié)果比前者偏低，需要企業(yè)在實(shí)際方法建立時(shí)進(jìn)行充分的評(píng)估。HCP抗原親和柱層析法對(duì)純化工藝要求更高，為保證抗體批間一致性，需要重點(diǎn)考察HCP抗原柱制備工藝、柱子的使用壽命、再制備的一致性等問(wèn)題。

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（Chinese Hamster Ovary，CHO）是抗體、重組蛋白、疫苗等生物制品生產(chǎn)中普遍使用的動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。在使用CHO宿主生產(chǎn)過(guò)程中，不可避免的會(huì)引入宿主細(xì)胞蛋白（HCP）雜質(zhì)，即使較低殘留水平下，HCPs也會(huì)存在免疫原性，降低產(chǎn)品蛋白穩(wěn)定性等的風(fēng)險(xiǎn)。因此需對(duì)生物制品中殘留的HCP進(jìn)行定量分析，以保證純化工藝的一致性和終產(chǎn)品的安全性。SHENTEK^®CHO HCP檢測(cè)試劑盒實(shí)現(xiàn)關(guān)鍵試劑全國(guó)產(chǎn)化，采用CHO 細(xì)胞（K1&S）補(bǔ)料分批培養(yǎng)工藝制備HCPs 免疫綿羊，獲得專門的抗體，用于CHO細(xì)胞系表達(dá)的生物制品(單抗，重組蛋白，疫苗等)中宿主細(xì)胞蛋白的殘留檢測(cè)。本試劑盒操作步驟少、快速、檢測(cè)專一性強(qiáng)、性能穩(wěn)定可靠。

宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測(cè)抗體覆蓋率評(píng)估實(shí)驗(yàn)操作復(fù)雜，需要在建立實(shí)驗(yàn)方法階段對(duì)關(guān)鍵步驟進(jìn)行充分的驗(yàn)證，以證明實(shí)驗(yàn)方法的穩(wěn)健性。湖州申科開發(fā)的基于磁珠捕獲的IMBS方法（immunomagnetic beads separation），在開發(fā)過(guò)程中對(duì)關(guān)鍵步驟進(jìn)行了充分驗(yàn)證,相關(guān)結(jié)果經(jīng)過(guò)專業(yè)評(píng)審，驗(yàn)證的內(nèi)容如下（部分）：①方法優(yōu)化：針對(duì)磁珠與抗體的偶聯(lián)比例、洗滌液體積、洗滌次數(shù)、洗脫次數(shù)等關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化驗(yàn)證，以保證方法的穩(wěn)健性；②過(guò)程質(zhì)控：二維電泳存在實(shí)驗(yàn)步驟多，時(shí)間跨度長(zhǎng)，中間步驟難以控制等缺陷，因此在等電聚焦實(shí)驗(yàn)部分設(shè)計(jì)了熒光標(biāo)記多肽，可快速判斷等電聚焦效果。在SDS-PAGE電泳的兩側(cè)增加40 ng銀染質(zhì)控，用于銀染顯色的控制；③方法重復(fù)性：針對(duì)2D分析以及LC-MS分析進(jìn)行重復(fù)性確認(rèn)，其中2D分析方法重復(fù)性可達(dá)到80%以上，LC-MS分析方法可到90%以上；④上樣量?jī)?yōu)化：針對(duì)2D分析以及LC-MS分析進(jìn)行上樣量確認(rèn)，消除上樣量差異對(duì)檢測(cè)結(jié)果帶來(lái)的影響；⑤假陽(yáng)性：排除樣品與陰性抗體之間是否存在非特異性結(jié)合，確定IMBS實(shí)驗(yàn)所設(shè)定的步驟、參數(shù)是否有假陽(yáng)性結(jié)果存在。

為什么定制化試劑盒是宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測(cè)的優(yōu)先選擇？原因之一是來(lái)源特定工藝下抗原及校準(zhǔn)品更具代表性。不同生物制品的上游生產(chǎn)工藝，包括培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件，收獲時(shí)機(jī)等差異，均會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生的HCPs的蛋白種類、豐度以及蛋白翻譯修飾不同，因此進(jìn)入到下游純化工藝的HCP類型也隨之發(fā)生變化，尤其是與藥物主成分共純化的HCPs會(huì)成為優(yōu)勢(shì)蛋白而存在于藥物原液或制劑中。HCP定制化ELISA檢測(cè)試劑盒通常選取實(shí)際生產(chǎn)工藝中上游發(fā)酵后的樣品進(jìn)行抗原及校準(zhǔn)品的制備，所制備的校準(zhǔn)品可以較為充分地反映實(shí)際生產(chǎn)工藝中的HCP，減少因抗原校準(zhǔn)品種類不足導(dǎo)致的漏檢以及定量不準(zhǔn)確的風(fēng)險(xiǎn)。

HEK 293細(xì)胞來(lái)源于人胚腎細(xì)胞，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞與基因治療領(lǐng)域，如病毒載體的生產(chǎn)等。盡管生物制品會(huì)經(jīng)過(guò)一系列純化工藝以去除相關(guān)雜質(zhì)，但殘留的微量宿主細(xì)胞蛋白（HCP）仍會(huì)引發(fā)機(jī)體的免疫應(yīng)答，影響產(chǎn)品的質(zhì)量和安全。因此，需要對(duì)生產(chǎn)工藝中殘留的HEK 293 HCP進(jìn)行定量檢測(cè)，使其符合放行標(biāo)準(zhǔn)。湖州申科生物HEK 293 HCP殘留檢測(cè)試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法）適用于HEK 293和HEK 293T來(lái)源的生物制品（重組蛋白類、細(xì)胞和基因治療類等）中宿主細(xì)胞蛋白的定量檢測(cè)。試劑盒檢測(cè)步驟少，快速，專一性強(qiáng)，性能穩(wěn)定可靠。

為什么定制化試劑盒是宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測(cè)的優(yōu)先選擇？這與檢測(cè)準(zhǔn)確性和藥物安全性密切相關(guān)。HCP ELISA 檢測(cè)作為多分析物檢測(cè)方法，其結(jié)果準(zhǔn)確性高度依賴校準(zhǔn)品、抗體質(zhì)量及檢測(cè)方法建立。定制化 HCP ELISA 檢測(cè)試劑盒的關(guān)鍵優(yōu)勢(shì)在于，它基于更具代表性的 HCP 抗原免疫動(dòng)物，由此產(chǎn)生的 HCP 抗體針對(duì)性更強(qiáng)。這種針對(duì)性抗體能極大降低 HCP 漏檢風(fēng)險(xiǎn)，尤其對(duì)生產(chǎn)工藝中特有的高風(fēng)險(xiǎn) HCP 因子，展現(xiàn)出更優(yōu)的檢出效果，為藥物的安全有效和質(zhì)量可控提供有力保障。