ROX通常并不指代一種特定的熒光定量PCR儀,而是一種熒光染料,在熒光定量PCR中常被用作被動(dòng)參考染料。其作用是用于校正熒光信號(hào),減少孔與孔之間由于加樣誤差、反應(yīng)體積差異、光學(xué)系統(tǒng)的微小變化以及蒸發(fā)等因素導(dǎo)致的熒光信號(hào)波動(dòng),提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的使用中,很多儀器都可以兼容ROX染料進(jìn)行信號(hào)校正。例如,賽默飛世爾的QuantStudio系列、ABI的7500、7900等型號(hào)的熒光定量PCR儀都支持ROX染料。不同的熒光定量PCR儀在檢測(cè)通道、光學(xué)系統(tǒng)、熱循環(huán)性能等方面存在差異,但只要其具備相應(yīng)的熒光檢測(cè)通道,能夠檢測(cè)ROX染料的熒光信號(hào),并在軟件中支持以ROX信號(hào)作為參考進(jìn)行數(shù)據(jù)校正,就可以在實(shí)驗(yàn)中使用ROX染料來(lái)輔助提高定量分析的準(zhǔn)確性。例如,QuantStudio1實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀采用新型Optiflex光學(xué)檢測(cè)架構(gòu),提供FAM、VIC和ROX三種常用激發(fā)和發(fā)射濾光片,實(shí)現(xiàn)3重實(shí)時(shí)定量分析。判斷食品是否含有轉(zhuǎn)基因成分以及轉(zhuǎn)基因成分的含量,保障消費(fèi)者的知情權(quán)和選擇權(quán)。無(wú)錫Cy5熒光定量PCR儀哪個(gè)好
SYBR Green I是一種雙鏈 DNA 結(jié)合染料,它能非特異性地嵌入雙鏈 DNA 的小溝中。在游離狀態(tài)下,SYBR Green I 發(fā)出微弱的熒光,但當(dāng)它與雙鏈 DNA 結(jié)合后,熒光信號(hào)會(huì)明顯增強(qiáng)。在熒光定量 PCR 反應(yīng)中,隨著 PCR 產(chǎn)物的不斷合成,SYBR Green I 與雙鏈 DNA 結(jié)合,熒光信號(hào)強(qiáng)度不斷增加,通過(guò)檢測(cè)熒光強(qiáng)度的變化來(lái)反映 PCR 產(chǎn)物的量,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板的定量分析。特點(diǎn):能與所有雙鏈 DNA 結(jié)合,不依賴(lài)于特定的序列,因此可用于各種 DNA 模板的定量分析,通用性強(qiáng)。其激發(fā)波長(zhǎng)約為 497nm,發(fā)射波長(zhǎng)約為 520nm,熒光顏色為綠色。但由于它非特異性結(jié)合雙鏈 DNA,可能會(huì)對(duì)引物二聚體等非特異性產(chǎn)物也產(chǎn)生熒光信號(hào),需要通過(guò)熔解曲線分析等方法來(lái)區(qū)分特異性產(chǎn)物和非特異性產(chǎn)物。EVA-Green熒光定量PCR儀廠家供應(yīng)TET 染料與核酸的結(jié)合具有較高的特異性和穩(wěn)定性,能夠在 PCR 反應(yīng)過(guò)程中準(zhǔn)確地指示目標(biāo)核酸的擴(kuò)增情況;
杭州柏恒的熒光定量PCR儀Q9600Pro是一款高效、快速的實(shí)驗(yàn)設(shè)備,突破性地實(shí)現(xiàn)了在短短5秒內(nèi)完成96個(gè)樣本所有熒光通道的檢測(cè)。這一令人驚嘆的速度不僅提高了實(shí)驗(yàn)效率,也**縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間,為科研工作者節(jié)省了寶貴的時(shí)間。Q9600Pro的快速檢測(cè)功能得益于其先進(jìn)的技術(shù)和創(chuàng)新的設(shè)計(jì)。其高度精密的光學(xué)系統(tǒng)和敏感的探測(cè)器能夠迅速捕獲樣本中的熒光信號(hào),并快速并行地對(duì)96個(gè)樣本進(jìn)行檢測(cè)。同時(shí),設(shè)備在檢測(cè)過(guò)程中實(shí)現(xiàn)了高度自動(dòng)化,**減少了人為干預(yù)的需求,保證了實(shí)驗(yàn)的一致性和可靠性。除了快速性外,Q9600Pro還具有出色的準(zhǔn)確性和靈敏度。其精密的溫控系統(tǒng)和穩(wěn)定的光路設(shè)計(jì)保證了不同通道間的溫度和光照均勻性,有效避免了實(shí)驗(yàn)的偏差。此外,設(shè)備使用高質(zhì)量的濾光片和光學(xué)元件,確保了熒光信號(hào)的精確檢測(cè),靈敏度高,可以準(zhǔn)確測(cè)量微量目標(biāo)物質(zhì),并避免假陽(yáng)性結(jié)果的產(chǎn)生。另外,Q9600Pro具有直觀友好的操作界面和強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理功能。科研人員可以通過(guò)設(shè)備的觸摸屏控制面板輕松設(shè)置實(shí)驗(yàn)參數(shù),并實(shí)時(shí)監(jiān)控實(shí)驗(yàn)進(jìn)度和結(jié)果。設(shè)備配備的專(zhuān)業(yè)分析軟件能夠快速處理檢測(cè)數(shù)據(jù),生成可視化的結(jié)果圖表,有助于科研人員快速準(zhǔn)確地解讀實(shí)驗(yàn)結(jié)果,加快研究進(jìn)展。
選擇適合自己的熒光定量 PCR 儀,需要綜合考慮多個(gè)因素,實(shí)驗(yàn)類(lèi)型:如果是進(jìn)行常規(guī)的基因表達(dá)分析、病原體定量檢測(cè),普通的單通道或多通道熒光定量 PCR 儀即可滿(mǎn)足需求。例如,賽默飛世爾的 QuantStudio 3,適用于基礎(chǔ)的基因表達(dá)和病原體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。若是涉及到復(fù)雜的多重 PCR 實(shí)驗(yàn)、SNP 基因分型,則需要選擇具有更多熒光通道、更高分辨率的儀器,如羅氏的 LightCycler 480,可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)熒光信號(hào),適用于多重分析。通量要求:根據(jù)實(shí)驗(yàn)樣本數(shù)量來(lái)選擇。對(duì)于樣本量較少的實(shí)驗(yàn),如小型實(shí)驗(yàn)室的科研項(xiàng)目或臨床診斷的少量樣本檢測(cè),96 孔板的熒光定量 PCR 儀就足夠,如伯樂(lè)的 CFX96。而對(duì)于高通量的檢測(cè)需求,如大規(guī)模的基因篩查、藥物研發(fā)中的大量樣本篩選,可能需要選擇 384 孔板的儀器,如 ABI 7900HT,能提高實(shí)驗(yàn)效率,減少實(shí)驗(yàn)成本。結(jié)核分枝桿菌的檢測(cè),傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法需要數(shù)周時(shí)間;
熒光定量PCR儀具有高靈敏度、高特異性和精確定量等特點(diǎn),被廣泛應(yīng)用于多個(gè)行業(yè),以下是一些主要的應(yīng)用行業(yè):生命科學(xué)研究行業(yè)基因表達(dá)分析:是研究基因表達(dá)調(diào)控的重要工具,可精確測(cè)定不同組織、不同發(fā)育階段以及不同生理病理?xiàng)l件下基因的表達(dá)水平,有助于深入了解基因的功能和生物過(guò)程的分子機(jī)制?;蚬δ苎芯浚和ㄟ^(guò)對(duì)基因敲除、過(guò)表達(dá)或 RNA 干擾等模型中相關(guān)基因表達(dá)量的定量分析,驗(yàn)證基因的功能,揭示基因之間的相互作用關(guān)系。分子進(jìn)化研究:分析不同物種或同一物種不同個(gè)體之間基因受到儀器的整體性能、光學(xué)系統(tǒng)設(shè)計(jì)、熒光染料質(zhì)量以及數(shù)據(jù)處理算法等多種因素的綜合影響。鎮(zhèn)江VIC熒光定量PCR儀詢(xún)問(wèn)報(bào)價(jià)
能夠準(zhǔn)確地識(shí)別出微弱的熒光信號(hào)變化,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)低水平核酸表達(dá)的檢測(cè)。無(wú)錫Cy5熒光定量PCR儀哪個(gè)好
熒光標(biāo)記探針?lè)ㄔ恚菏褂靡环N特異性的熒光標(biāo)記探針,它能與目標(biāo) DNA 序列雜交。探針的 5' 端標(biāo)記有熒光報(bào)告基團(tuán),3' 端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)。在游離狀態(tài)下,報(bào)告基團(tuán)發(fā)出的熒光會(huì)被淬滅基團(tuán)吸收,無(wú)法檢測(cè)到熒光信號(hào)。當(dāng) PCR 反應(yīng)進(jìn)行時(shí),DNA 聚合酶在延伸引物的過(guò)程中,會(huì)將探針?biāo)?,使?bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離,報(bào)告基團(tuán)發(fā)出的熒光信號(hào)就可以被儀器檢測(cè)到。每擴(kuò)增一條 DNA 鏈,就會(huì)有一個(gè)探針被水解,釋放出一個(gè)熒光信號(hào),熒光信號(hào)的強(qiáng)度與 PCR 產(chǎn)物的數(shù)量成正比。過(guò)程:在 PCR 反應(yīng)的退火階段,熒光標(biāo)記探針會(huì)與目標(biāo) DNA 序列特異性結(jié)合。在延伸階段,DNA 聚合酶的 5' - 3' 外切酶活性會(huì)將探針從 5' 端開(kāi)始逐個(gè)水解,使報(bào)告基團(tuán)游離出來(lái),產(chǎn)生熒光信號(hào)。儀器會(huì)在每個(gè)循環(huán)的延伸階段檢測(cè)熒光信號(hào)的強(qiáng)度,隨著 PCR 反應(yīng)的進(jìn)行,熒光信號(hào)逐漸增強(qiáng),同樣可以得到 Ct 值。定量依據(jù):與熒光染料法類(lèi)似,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)待測(cè)樣本的 Ct 值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出起始模板量。由于熒光標(biāo)記探針具有特異性,能與特定的目標(biāo)序列雜交,因此可以更準(zhǔn)確地對(duì)目標(biāo)基因進(jìn)行定量分析,減少非特異性擴(kuò)增的干擾。無(wú)錫Cy5熒光定量PCR儀哪個(gè)好