熒光定量 PCR 儀是一種精密的儀器,正確的維護和保養(yǎng)可以延長其使用壽命,保證儀器的性能和檢測結果的準確性。日常維護儀器清潔:定期清理儀器表面的灰塵和污漬,使用干凈的軟布擦拭。對于儀器內部,可使用無絨布或棉簽輕輕擦拭光路系統(tǒng)、反應模塊等部件,避免刮傷。注意不要讓液體流入儀器內部。檢查儀器狀態(tài):每次使用前檢查儀器的各項參數(shù)是否正常,如熒光檢測系統(tǒng)、加熱制冷模塊等。查看儀器的指示燈、顯示屏是否正常工作,如有異常及時記錄并聯(lián)系維修人員。及時清理樣品殘留:實驗結束后,及時清理反應板和樣品槽中的殘留樣品,防止樣品干涸后形成頑固污漬,影響后續(xù)實驗??墒褂脺睾偷那鍧崉┎潦茫缓笥谜麴s水沖洗干凈,再用干凈的軟布擦干。結核分枝桿菌的檢測,傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法需要數(shù)周時間;YELLOW熒光定量PCR儀價格
熒光標記探針法原理:使用一種特異性的熒光標記探針,它能與目標 DNA 序列雜交。探針的 5' 端標記有熒光報告基團,3' 端標記有熒光淬滅基團。在游離狀態(tài)下,報告基團發(fā)出的熒光會被淬滅基團吸收,無法檢測到熒光信號。當 PCR 反應進行時,DNA 聚合酶在延伸引物的過程中,會將探針水解,使報告基團與淬滅基團分離,報告基團發(fā)出的熒光信號就可以被儀器檢測到。每擴增一條 DNA 鏈,就會有一個探針被水解,釋放出一個熒光信號,熒光信號的強度與 PCR 產(chǎn)物的數(shù)量成正比。過程:在 PCR 反應的退火階段,熒光標記探針會與目標 DNA 序列特異性結合。在延伸階段,DNA 聚合酶的 5' - 3' 外切酶活性會將探針從 5' 端開始逐個水解,使報告基團游離出來,產(chǎn)生熒光信號。儀器會在每個循環(huán)的延伸階段檢測熒光信號的強度,隨著 PCR 反應的進行,熒光信號逐漸增強,同樣可以得到 Ct 值。定量依據(jù):與熒光染料法類似,通過標準品建立標準曲線,根據(jù)待測樣本的 Ct 值在標準曲線上計算出起始模板量。由于熒光標記探針具有特異性,能與特定的目標序列雜交,因此可以更準確地對目標基因進行定量分析,減少非特異性擴增的干擾。鎮(zhèn)江HEX熒光定量PCR儀有哪些TET 并不是一種特定品牌或型號的熒光定量 PCR 儀,而是一種熒光染料的名稱。
杭州柏恒(Bioer)是一家專注于生物醫(yī)藥領域的科研設備制造商,其推出的熒光定量PCR儀被***應用于分子生物學實驗室中。杭州柏恒熒光定量PCR儀具有高靈敏度、高精度、高通量和操作簡便等特點,在基因表達分析、基因型分析、病毒載量檢測等領域發(fā)揮著重要作用。首先,杭州柏恒熒光定量PCR儀采用熒光探針技術,能夠實現(xiàn)對靶基因的快速、精細定量。用戶可以選擇適當?shù)奶结樈M合,結合PCR擴增反應,實現(xiàn)對目標基因的高靈敏檢測。儀器還具有多通道同時檢測功能,可以同時進行多個基因的定量分析,**提高了實驗效率和通量。其次,杭州柏恒熒光定量PCR儀具有高度自動化的特點,可以通過預設程序自動完成PCR擴增反應、信號檢測、數(shù)據(jù)分析等步驟,減少了人為操作誤差,提高了實驗的穩(wěn)定性和可靠性。用戶只需簡單設置實驗參數(shù)和運行程序,即可得到準確的定量結果和數(shù)據(jù)分析。此外,杭州柏恒熒光定量PCR儀還配備了強大的數(shù)據(jù)分析軟件,能夠實現(xiàn)數(shù)據(jù)的自動處理和結果的快速生成,包括擴增曲線分析、熔解曲線分析、相對表達量計算等功能。這些功能極大地簡化了實驗數(shù)據(jù)的處理流程,提高了數(shù)據(jù)分析的效率和準確性。在實際應用中。
熒光定量 PCR 儀是一種通過熒光染料或熒光標記的特異性探針,對 PCR 產(chǎn)物進行標記跟蹤,實時監(jiān)測反應過程的儀器。儀器特點:高靈敏度和特異性:能檢測極低拷貝數(shù)的核酸模板,對目標序列具有高度特異性,可減少假陽性和假陰性結果。準確 quantification:通過實時監(jiān)測熒光信號,實現(xiàn)對核酸模板的準確定量,結果準確可靠。高 throughput:可同時檢測多個樣品,大幅提高檢測效率,節(jié)省時間和成本。高度自動化:具備自動進樣、反應程序設置、數(shù)據(jù)采集和分析等功能,操作簡便,減少人為誤差。并且,TET 染料具有較高的熒光量子產(chǎn)率,即在受到激發(fā)后能夠高效地發(fā)出熒光。
熒光染料法原理:一些熒光染料(如 SYBR Green I)能特異性地結合到雙鏈 DNA 上。在 PCR 反應體系中,隨著 DNA 擴增產(chǎn)物的不斷增加,與雙鏈 DNA 結合的熒光染料也越來越多,熒光信號強度與 PCR 產(chǎn)物的數(shù)量呈正相關。通過檢測熒光信號的強度變化,就可以實時監(jiān)測 PCR 反應的進程。過程:在 PCR 反應的每一個循環(huán)中,當溫度降低到退火溫度時,引物與模板結合,DNA 聚合酶開始延伸引物,合成新的 DNA 鏈。此時,熒光染料會結合到新合成的雙鏈 DNA 上,儀器會在特定的時間點檢測熒光信號的強度。隨著循環(huán)次數(shù)的增加,熒光信號逐漸增強,當信號強度達到設定的閾值時,對應的循環(huán)數(shù)被稱為閾值循環(huán)數(shù)(Ct 值)。定量依據(jù):在一定的范圍內,起始模板量與 Ct 值呈對數(shù)關系。即起始模板量越多,達到閾值所需的循環(huán)數(shù)越少,Ct 值越??;反之,起始模板量越少,Ct 值越大。通過已知濃度的標準品建立標準曲線,再根據(jù)待測樣本的 Ct 值,就可以在標準曲線上計算出其對應的起始模板量。在一些熒光定量 PCR 儀的相關介紹中會提及對 TET 染料的支持。江蘇 ROX熒光定量PCR儀檢測
這有助于及時發(fā)現(xiàn)胎兒的遺傳缺陷,為家庭提供生育決策的依據(jù),減少出生缺陷的發(fā)生。YELLOW熒光定量PCR儀價格
熒光定量 PCR 儀的檢測結果會受到多種因素的影響,包括儀器設備、試劑質量、樣本處理以及實驗操作等方面,以下是具體介紹:引物和探針:引物和探針的特異性、純度及濃度對檢測結果影響明顯。若引物特異性不好,可能會與非目標序列結合,產(chǎn)生非特異性擴增,干擾目標基因的定量。探針的質量和標記效率也會影響熒光信號的強度和穩(wěn)定性,進而影響檢測的準確性。酶的活性:Taq 酶等聚合酶的活性和穩(wěn)定性是保證 PCR 反應順利進行的關鍵。酶活性過低會導致擴增效率低下,產(chǎn)量不足;而酶的穩(wěn)定性差可能在反應過程中失活,使擴增反應中斷,影響結果的重復性和準確性。反應緩沖液:反應緩沖液的成分和 pH 值等條件對 PCR 反應有重要影響。不合適的緩沖液條件可能影響酶的活性、引物與模板的結合以及 DNA 的穩(wěn)定性,從而導致擴增效果不佳,檢測結果不準確。YELLOW熒光定量PCR儀價格