宿主細胞蛋白來源中往往同時存在核酸，胞膜脂類，培養(yǎng)基中的氨基酸等非HCP成分會干擾總蛋白的檢測準確性，需要在檢測之前進行純化前處理，同時對總蛋白檢測方法進行方法學確認。HCP是一種多蛋白質(zhì)的混合物，總蛋白定量方法之間檢測結(jié)果會存在一定程度的差異，這也是導致HCP免疫檢測方法結(jié)果差異的原因之一。若HCP蛋白定量方法間檢測結(jié)果差異較大，一般同時采用2種以上經(jīng)過確認的方法檢測，再取均值?？偟鞍讬z測方法的定量限一般只能達到μg/mL水平,但是HCP檢測試劑盒的產(chǎn)品校準品在ng/mL水平。從HCP高濃度原液稀釋到低濃度產(chǎn)品校準品中存在稀釋誤差，需要對產(chǎn)品校準品進行重新標定賦值。

美國藥典<1132>章節(jié) 和歐洲藥典<2.6.34>章節(jié)建議對于即將進入商業(yè)化生產(chǎn)的（臨床III期及以后）或生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的生物制品采用定制化ELISA試劑盒進行宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測，原因可能是：①確保檢測方法可以充分覆蓋實際工藝產(chǎn)生的HCPs，避免漏檢關鍵雜質(zhì)；②支持更準確的免疫原性和安全性評估；③提供真實的工藝表征數(shù)據(jù)，而非推測數(shù)據(jù)；④滿足商業(yè)化生產(chǎn)質(zhì)量控制的方法一致性。此外，對目前市場上常見的HCP ELISA商業(yè)化試劑盒進行了測試，并與HCP ELISA定制化試劑盒進行對比，實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同商業(yè)化試劑盒檢測同一樣品的檢測值差異大，且準確性均低于定制化試劑盒，表明定制化試劑盒更能滿足產(chǎn)品質(zhì)量控制所需。

為了更好地控制工藝和保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定，各國監(jiān)管機構(gòu)均要求提供使用的宿主細胞蛋白殘留檢測ELISA試劑盒的抗體覆蓋率數(shù)據(jù)。一般需進行覆蓋率分析的場景一般有以下幾種情況：①臨床II期后，若是繼續(xù)使用商品化試劑盒，則需要評估試劑盒抗體覆蓋率是否可以繼續(xù)用于質(zhì)量監(jiān)控；②臨床III期及以后階段，產(chǎn)品研究者開發(fā)了平臺化或工藝專屬型的HCP監(jiān)測方法，該類試劑盒在使用前要評估覆蓋率水平與商業(yè)化覆蓋水平的差異；③申報時沒有提交覆蓋率數(shù)據(jù)，監(jiān)管機構(gòu)可能會對企業(yè)提出發(fā)補的要求；④產(chǎn)品上市后發(fā)生了包括生產(chǎn)場地變更，工藝變更，HCP分析方法變更等因素的變更，研究者則需要評估變更前后抗體覆蓋率水平的差異，以及該差異對藥品質(zhì)量與安全帶來的影響。

HCP是由宿主細胞（通常是哺乳動物細胞或微生物）產(chǎn)生的蛋白質(zhì)。這些蛋白質(zhì)具有潛在的風險，可能會影響藥物的安全性和有效性。因此，HCP殘留量是生物藥物中一個關鍵質(zhì)量屬性，要求在藥物的開發(fā)和生產(chǎn)階段對HCP的存在進行嚴格的監(jiān)控、管理和記錄。隨著生產(chǎn)流程，生物制品的純度在逐漸提高，HCPs總量和種類卻在持續(xù)降低，這使得對HCP的分析和監(jiān)測工作變得更加具有挑戰(zhàn)性。在這種情況下，開發(fā)高效的HCP富集材料和技術變得尤為關鍵。低豐度宿主殘留蛋白富集試劑盒，專為生物制品（如單抗、融合蛋白等）中HCP的富集和去除高豐度蛋白而設計，利用磁珠法構(gòu)建了一個多樣化且復雜的親和配體庫，旨在高效地識別并結(jié)合目標蛋白。其設計不僅針對傳統(tǒng)的單一蛋白，還能適用于融合蛋白、單克隆抗體等多種生物樣本類型，展現(xiàn)了較強的適用性和靈活性。

湖州申科生物致力于提供符合嚴格法規(guī)要求的宿主細胞蛋白（HCP）ELISA檢測試劑盒。為確保產(chǎn)品滿足生物制品（如抗體藥、疫苗）申報（如IND/BLA）的監(jiān)管標準，申科構(gòu)建了全流程依規(guī)開發(fā)的質(zhì)量體系：整個開發(fā)過程嚴格遵循ISO 13485質(zhì)量標準，并滿足用戶審計要求。其開發(fā)流程明確包含三個關鍵階段：①HCP殘留定量檢測參考品開發(fā)：關鍵在于建立可靠的HCP抗原參考品，涵蓋抗原的表征、量值溯源與賦值、均一性和穩(wěn)定性考察等，確保檢測的準確性與代表性。②高質(zhì)量大批量抗體制備：通過優(yōu)化的HCP抗原動物免疫策略，結(jié)合嚴謹?shù)目贵w質(zhì)量標準（如建立標準、覆蓋率驗證）和穩(wěn)定的制備工藝，生產(chǎn)具有高特異性和廣覆蓋度的檢測抗體，保證檢測的特異性和靈敏度。③檢測體系開發(fā)及驗證：進行嚴謹?shù)臋z測體系開發(fā)與驗證工作，其驗證方案符合ICH指導原則及藥典關于分析方法驗證的標準要求。同時，嚴格執(zhí)行物料質(zhì)控，并在潔凈車間環(huán)境中進行生產(chǎn)，確保試劑盒方法的穩(wěn)健性、重現(xiàn)性與法規(guī)符合性。這一從抗原源頭到成品體系的標準化、合規(guī)化開發(fā)流程，是湖州申科HCP檢測產(chǎn)品品質(zhì)與可靠性的根本保障。

LC-MS技術作為生物制品宿主細胞蛋白殘留檢測新趨勢，需考慮以下幾點：①穩(wěn)定性：需要HCPs LC-MS檢測流程進行驗證，全流程都需要有嚴格的QC控制，確保檢測結(jié)果的一致性和穩(wěn)定性。②可重復性：不同類型生物制品中HCPs提取效率不同，不同人員操作存在差異，需要在上機前通過不同方法評估HCPs的提取效率，避免人為因素造成結(jié)果重復性差。③準確度：方法開發(fā)與驗證階段，通過設立內(nèi)標與定量算法，根據(jù)內(nèi)標響應回算得到HCPs的含量，確保定量結(jié)果的準確性。④抗干擾能力：高豐度蛋白和特殊基質(zhì)會對質(zhì)譜檢測產(chǎn)生影響，需要通過前處理手段對高豐度蛋白或特殊的基質(zhì)進行去除，以減少其對HCPs肽段在質(zhì)譜檢測時的影響。⑤真實性：樣品中除HCPs以外的物質(zhì)在質(zhì)譜分析中同樣會產(chǎn)生質(zhì)譜信號，需要去除復雜的背景噪音避免假陽性和假陰性的出現(xiàn)，建立合理標準的生信分析流程。分析流程建立過程中同樣需要建立嚴格的質(zhì)控QC標準，并通過后期不同方法進行驗證，確定其標準的真實性。