湖州申科生物通過自主可控的供應鏈體系與嚴格驗證的技術(shù)性能，確保HCP檢測試劑盒的長期穩(wěn)定供應與優(yōu)異的分析能力。一方面，公司實現(xiàn)了關(guān)鍵物料的自研自產(chǎn)：校準品采用凍干工藝大規(guī)模制備，可穩(wěn)定保存10年以上；抗體通過大動物免疫獲得，產(chǎn)量可滿足≥10,000盒試劑盒的生產(chǎn)需求，保障同批次抗體持續(xù)供應超過10年；試劑盒經(jīng)多批次驗證顯示良好的批內(nèi)與批間一致性。另一方面，所有產(chǎn)品參考ICH Q2（R2）和ICH M10法規(guī)要求完成驗證：以E.coli HCP產(chǎn)品為例，其線性范圍（243-1 ng/mL）的R2>0.999，各濃度點回收率偏差≤5%；準確度達81.2%-111.6%，中間精密度CV值5.7%-12.4%；LLOQ低至1.5 ng/mL，且對多種宿主細胞（如CHO、HEK293等）的交叉反應均低于檢測限。同時，通過二維電泳（檢出826個蛋白點）與質(zhì)譜法（鑒定2204個蛋白點）雙重表征校準品，并采用IMBS-2D（>70%）與IMBS-MS（84.7%）正交技術(shù)驗證抗體覆蓋率，從源頭確保檢測結(jié)果的全面性與可靠性。

宿主細胞蛋白來源中往往同時存在核酸，胞膜脂類，培養(yǎng)基中的氨基酸等非HCP成分會干擾總蛋白的檢測準確性，需要在檢測之前進行純化前處理，同時對總蛋白檢測方法進行方法學確認。HCP是一種多蛋白質(zhì)的混合物，總蛋白定量方法之間檢測結(jié)果會存在一定程度的差異，這也是導致HCP免疫檢測方法結(jié)果差異的原因之一。若HCP蛋白定量方法間檢測結(jié)果差異較大，一般同時采用2種以上經(jīng)過確認的方法檢測，再取均值?？偟鞍讬z測方法的定量限一般只能達到μg/mL水平,但是HCP檢測試劑盒的產(chǎn)品校準品在ng/mL水平。從HCP高濃度原液稀釋到低濃度產(chǎn)品校準品中存在稀釋誤差，需要對產(chǎn)品校準品進行重新標定賦值。

各國法規(guī)要求必須對生物藥品進行分析和純化，以將宿主細胞蛋白HCP降低到可接受的水平；即使終產(chǎn)品中痕量的宿主細胞蛋白HCP到達患者體內(nèi)，尚不清楚特定的殘留蛋白質(zhì)雜質(zhì)是否會影響藥物的穩(wěn)定性或免疫原性。關(guān)于HCP的限量標準，美國藥典推薦值為終產(chǎn)品的HCP水平1-100 ng/mg；中國藥典各論中E.coli菌體HCP應不高于蛋白質(zhì)總量的0.10% (1000 ng/mg)，CHO細胞HCP應不高于蛋白質(zhì)總量的0.05% (500 ng/mg)，假單胞菌HCP應不高于蛋白質(zhì)總量的0.02% (200 ng/mg)。

湖州申科生物結(jié)合不同宿主實際的生產(chǎn)工藝，通過高質(zhì)量免疫原和 HCP 多抗的標準化制備流程，獲得高效價、高覆蓋率的抗體，開發(fā)了適用于大腸桿菌表達菌 (BL21) 生產(chǎn)工藝、克隆菌堿裂法提取質(zhì)粒工藝的 SHENTEK®E.coli HCP檢測試劑盒， 適用于CHO\MDCK\HEK293\Sf9\VERO\畢赤酵母等不同宿主的 HCP 檢測試劑盒。用于中間品、原液及終產(chǎn)品等的HCP定量監(jiān)測。為確保 ELISA 對HCP定量檢測的準確性，須對 HCP 抗體覆蓋率進行驗證。湖州申科抗體覆蓋率平臺采用2D Clean-up 試劑盒去除蛋白樣品的干擾物（洗滌劑、鹽、脂質(zhì)、酚類和核酸等離子污染物），并設置2D 質(zhì)控標準品進行嚴格質(zhì)控，同時以陰性抗體為對照平行試驗，以提高結(jié)果準確度。

中國倉鼠卵巢細胞（Chinese Hamster Ovary，CHO）是抗體、重組蛋白、疫苗等生物制品生產(chǎn)中普遍使用的動物細胞表達系統(tǒng)。在使用CHO宿主生產(chǎn)過程中，不可避免的會引入宿主細胞蛋白（HCP）雜質(zhì)，即使較低殘留水平下，HCPs也會存在免疫原性，降低產(chǎn)品蛋白穩(wěn)定性等的風險。因此需對生物制品中殘留的HCP進行定量分析，以保證純化工藝的一致性和終產(chǎn)品的安全性。SHENTEK^®CHO HCP檢測試劑盒實現(xiàn)關(guān)鍵試劑全國產(chǎn)化，采用CHO 細胞（K1&S）補料分批培養(yǎng)工藝制備HCPs 免疫綿羊，獲得專門的抗體，用于CHO細胞系表達的生物制品(單抗，重組蛋白，疫苗等)中宿主細胞蛋白的殘留檢測。本試劑盒操作步驟少、快速、檢測專一性強、性能穩(wěn)定可靠。

湖州申科生物參考USP通則<1132.1>闡述的內(nèi)容，依托公司深耕生物制品質(zhì)量控制領(lǐng)域十余年經(jīng)驗，針對LC-MS檢測HCPs方法進行了評價與優(yōu)化。同時通過對LC-MS檢測HCPs整體流程建立完整的質(zhì)控，建立起一套抗干擾能力強、穩(wěn)定性好、準確度高、結(jié)果真實可靠的LC-MS檢測HCPs標準方法。檢測技術(shù)平臺分成樣品制備、質(zhì)譜檢測、數(shù)據(jù)生信分析及質(zhì)譜結(jié)果方法驗證四部分，已使用LC-MS平臺進行了293T、不同工藝E.coli、CHO、Vero、MDCK、Sf9等不同工程細胞HCPs抗體覆蓋率的檢測分析。