湖州申科在宿主細(xì)胞蛋白（HCP）ELISA檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域擁有深厚的積累，已成功構(gòu)建高質(zhì)量、全流程的自有開(kāi)發(fā)平臺(tái)，覆蓋HCP檢測(cè)試劑盒研發(fā)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)：①抗原表征與制備：基于合規(guī)平臺(tái)的HCP Reference/Antigen制備能力，采用2D凝膠電泳等先進(jìn)技術(shù)確保抗原庫(kù)的代表性。②動(dòng)物免疫與抗體制備：依托自有免疫動(dòng)物平臺(tái)，控制免疫原設(shè)計(jì)與動(dòng)物免疫過(guò)程，產(chǎn)出高特異性、廣覆蓋度的抗體。③體系開(kāi)發(fā)與驗(yàn)證：憑借成熟的技術(shù)經(jīng)驗(yàn)開(kāi)發(fā)高靈敏度、高穩(wěn)定性的檢測(cè)體系，并嚴(yán)格遵循GMP標(biāo)準(zhǔn)完成方法學(xué)驗(yàn)證。該平臺(tái)通過(guò)全流程自主可控的技術(shù)整合，從源頭保證試劑盒性能的一致性與可靠性，明顯降低不同批次試劑盒的檢測(cè)變異性。其研發(fā)的HCP ELISA試劑盒已成功服務(wù)于國(guó)內(nèi)外200余家生物醫(yī)藥企業(yè)，為生物制品（如單抗、疫苗）的工藝開(kāi)發(fā)、質(zhì)量控制及法規(guī)申報(bào)（如IND/BLA）提供符合監(jiān)管要求的定制化檢測(cè)解決方案。

宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測(cè)抗體覆蓋率評(píng)估：法規(guī)推薦的方法有兩大類：一類是傳統(tǒng)2D-WB法，另一類是基于抗體親和的免疫捕獲類方法。傳統(tǒng)2D-WB法存在需要蛋白變性，樣品需要前處理（破壞蛋白天然表位）；轉(zhuǎn)膜效率低；易產(chǎn)生非特異性等缺陷，難以反映真實(shí)的覆蓋率水平。湖州申科自主開(kāi)發(fā)了免疫磁珠捕獲分離技術(shù)（immunomagnetic beads separation，IMBS)，利用免疫磁珠的半液態(tài)性質(zhì)，可以在懸浮的條件下與HCP樣本充分混勻結(jié)合，整個(gè)過(guò)程蛋白無(wú)需變性，結(jié)合方式與ELISA檢測(cè)條件相似，可以獲得更真實(shí)的覆蓋率結(jié)果。

宿主細(xì)胞蛋白（HCP）作為生物制品中來(lái)源于細(xì)胞基質(zhì)的殘留雜質(zhì)，具有明顯的異質(zhì)性特征。其復(fù)雜性體現(xiàn)在三個(gè)方面：①理化特性差異：HCP涵蓋胞內(nèi)及分泌蛋白，涉及關(guān)鍵生理功能，具有涵蓋區(qū)間大的等電點(diǎn)（pI 3-11）、分子量范圍（5-250kDa）及疏水性；②上游工藝影響：不同發(fā)酵工藝（如細(xì)胞株、培養(yǎng)條件）誘導(dǎo)獨(dú)特的翻譯后修飾（PTM），導(dǎo)致HCP總量與生化復(fù)雜性增加；③下游工藝與產(chǎn)物特性干擾：抗體、細(xì)胞因子等重組蛋白或病毒類藥物的純化工藝會(huì)選擇性殘留特定HCP，且產(chǎn)物形式（如大腸桿菌的包涵體/可溶性表達(dá)）直接影響HCP殘留譜。針對(duì)特定生產(chǎn)工藝開(kāi)發(fā)定制化檢測(cè)方案是準(zhǔn)確監(jiān)控宿主細(xì)胞蛋白殘留的關(guān)鍵。

LC-MS/MS 作為一種成熟可靠的蛋白質(zhì)組分析技術(shù)，憑借其超高的分辨率與準(zhǔn)確度在生物分析領(lǐng)域占據(jù)重要地位。該技術(shù)不僅能實(shí)現(xiàn)對(duì)低含量宿主細(xì)胞殘留蛋白（HCP）的定性檢測(cè)，還可通過(guò)建立專屬蛋白質(zhì)譜庫(kù)準(zhǔn)確鑒定 HCP 的具體種類，為深入解析殘留蛋白組成提供關(guān)鍵支撐。不過(guò)，其應(yīng)用過(guò)程中面臨的關(guān)鍵挑戰(zhàn)在于，如何優(yōu)化 LC-MS 方法以滿足 GMP 規(guī)范中對(duì)產(chǎn)品放行檢測(cè)的嚴(yán)格要求。在質(zhì)譜檢測(cè)環(huán)節(jié)，通過(guò)引入表征清晰的內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)蛋白，能夠準(zhǔn)確分析 HCPs 的整體組成，并有效鑒別其中具有潛在風(fēng)險(xiǎn)的高風(fēng)險(xiǎn)蛋白。這一技術(shù)手段不僅為開(kāi)發(fā)產(chǎn)品專屬的 HCP ELISA 檢測(cè)方法提供有力數(shù)據(jù)支持，還能助力工藝優(yōu)化升級(jí)，加速推動(dòng)生物制品從研發(fā)到獲批上市的全流程進(jìn)程。

為什么定制化試劑盒是宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測(cè)的優(yōu)先選擇？這與檢測(cè)準(zhǔn)確性和藥物安全性密切相關(guān)。HCP ELISA 檢測(cè)作為多分析物檢測(cè)方法，其結(jié)果準(zhǔn)確性高度依賴校準(zhǔn)品、抗體質(zhì)量及檢測(cè)方法建立。定制化 HCP ELISA 檢測(cè)試劑盒的關(guān)鍵優(yōu)勢(shì)在于，它基于更具代表性的 HCP 抗原免疫動(dòng)物，由此產(chǎn)生的 HCP 抗體針對(duì)性更強(qiáng)。這種針對(duì)性抗體能極大降低 HCP 漏檢風(fēng)險(xiǎn)，尤其對(duì)生產(chǎn)工藝中特有的高風(fēng)險(xiǎn) HCP 因子，展現(xiàn)出更優(yōu)的檢出效果，為藥物的安全有效和質(zhì)量可控提供有力保障。

大腸埃希氏菌(Escherichia coli，E. coli )又稱大腸桿菌，其作為模式微生物被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究中。大腸桿菌是表達(dá)藥用異源蛋白的常用微生物，在被批準(zhǔn)的藥用蛋白中，大約30%的產(chǎn)品以大腸桿菌作為表達(dá)宿主菌。與其他表達(dá)平臺(tái)一樣，盡管下游復(fù)雜的純化步驟已經(jīng)去除了大量的雜質(zhì)，但終產(chǎn)品中仍會(huì)存在HCP殘留風(fēng)險(xiǎn)，必須對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制，使其符合放行標(biāo)準(zhǔn)。湖州申科生物E.coli表達(dá)菌HCP殘留檢測(cè)試劑盒用于大腸桿菌表達(dá)菌株BL21來(lái)源的宿主細(xì)胞蛋白定量檢測(cè)，適用于重組蛋白類產(chǎn)品的工藝中間品和原液類樣品，如白細(xì)胞介素（IL）、干擾素（rhIFN）、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（rhGM-CSF）、腫瘤壞死因子（rhTNF）、促生長(zhǎng)因子（EGF/FGF/PDGF）等。試劑盒檢測(cè)步驟少，快速，專一性強(qiáng)，性能穩(wěn)定可靠。